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アルツハイマー病脳における老人斑形成機序に関する研究

阿尔茨海默病脑内老年斑形成机制研究

基本信息

批准号：
05680675
负责人：
播口之朗
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至 1995
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05680675/
关键词：
アルツハイマー病老人斑アミロイド APP ibotenic acid カテプシンD クラスリン GFAP ubiquitin MAPIa

项目摘要

アルツハイマー病(AD)脳の老人斑に沈着するアミロイド線維の構成蛋白はアミロイドβ蛋白前駆体(APP)から切り出される38-43アミノ残基のアミロイドβ蛋白(Aβ)である。APPは1回膜貫通型の受容体蛋白としての構造を有しており、その機能を考える場合に細胞内に位置するC末端側部分の動態を明らかにすることが重要である。本研究では、このような知見に基づきAD脳におけるAPPのC端部分の分布について検討することが老人斑形成機序に寄与すると考えた。APP分子C末端断片の動態を検討するために、Multiple Antigen Peptide(MAP)構造をもつAPP分子のC末端アミノ酸14残基合成ペプチド(APP 682-695,YENPTYKFFEQMQN)に対するモノクローナル抗体及びポリクローナル抗体を作製した。これらの抗体を用いてAD脳の海馬を含む側頭葉領域での免疫組織化学的検索を行った。抗血清R2Bでは皮質の神経細胞及びその周辺に多数の顆粒状蓄積物、血管壁周囲を陽性に染色した。一方、モノクローナル抗体6H・12では海馬周辺を中心に典型的な老人斑とは異なる斑状の細胞外構造物が認められた。この構造物は健常者脳では殆ど認められず、ADに特徴的と考えられた。また、R2Bの認識する構造物とは形態、出現頻度、部位ともに異なっていた。AD脳連続切片を用いた検討では、このAPP分子C末端14残基配列に対するモノクローナル抗体で染色された異常構造物は抗Aβ抗体では染色されなかった。AD脳皮質ホモジネートの各抗体を用いたウエスタンブロットによる検討において、6H12は23、29、30KDaのバンドを染色し、6H12の染色する構造物の成分としてAβを含んだAPPのC端部分断片が存在する可能性が示唆された。APP分子C末端14残基配列はin vitroにおいてフィラメント様構造物及びアモルファス構造物を形成したが、その構造物の免疫電顕の結果、R2Bは直径7-10nmのフィラメント様構造物と結合したが、6H12はフィラメント様構造物ではなく、むしろアモルファスな構造物を強く認識した。これは6H12とR2Bの認識するコンフォメーションが異なることを示しており免疫組織化学の結果と一致した。本研究によりAD脳内で特殊なコンフォメーションをもつAPPのC端部分が細胞外で斑状に集積し、その構造物にはAPPのAβ部分が含まれている可能性があることが示唆された。老人斑形成においてAPPのC端部分の関与については報告は少ないが本研究で明らかにされた集積物が老人斑形成の中間体である可能性も考えられ今後その点について検討を加えていく予定である。

A protein fragment containing residues 38-43 of the beta protein precursor (APP) was isolated from the protein component of Alzheimer's disease (AD). The structure and function of APP1 membrane penetrating receptor protein are important when the intracellular position and C-terminal part of APP1 membrane penetrating receptor protein are examined. This study is to investigate the distribution of the C-terminal portion of the APP and the mechanism of senile plaque formation. The structure of Multiple Antigen Peptide(MAP) was used to study the dynamics of C-terminal fragment of APP molecule, and the synthesis of C-terminal amino acid 14 residue of APP molecule (APP 682-695,YENPTYKFFEQMQN) was used to prepare anti-APP antibody and anti-APP antibody. Immunohistochemical staining of the hippocampus, including the lateral lobe of the hippocampus, was performed with antibodies. Antiserum R2B was positive for cortical neurons and most of the granular deposits in the periphery and the peripheral blood vessel wall. A side, The structure of this kind is not normal, but it is very difficult to recognize the characteristics of AD. The structure of R2B is different in shape, frequency and position. AD cDNA sections were examined for the C-terminal 14 residue alignment of the APP molecule and stained for anti-A β antibodies. The possibility of the existence of Aβ, including the C-terminal fragment of APP, in the structure stained with 6H12 at 23, 29, and 30kDa was demonstrated. APP molecule C-terminal 14 residue alignment in vitro structure and structure formation, the results of immunoelectrochemistry of other structures, R2B diameter 7-10nm structure and binding, 6H12 structure and structure strong recognition. The results of immunohistochemistry were consistent with those of H12 and R2B. This study indicates the possibility that the C-terminal portion of APP may accumulate in extracellular spots, and that the Aβ portion of APP may be contained in other structures. The relationship between the C-terminal part of APP and age-spot formation is discussed. In this study, the possibility of aggregation and intermediate of age-spot formation is examined.