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内因性マリファナ様物質のアナンダミドの代謝酵素に関する研究

内源性大麻样物质anandamide代谢酶的研究

基本信息

批准号：
07670147
负责人：
上田夏生
金额：
$ 1.22万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

アナンダミドは内因性のカンナビノイド受容体アゴニストとして発見され、その構造はアラキドン酸のエタノールアミドと同定されている。アナンダミドは何らかの細胞刺激によって生成し、作用後すみやかに遊離アラキドン酸とエタノールアミンに加水分解されて不活化されるものと考えられているが、アナンダミドの代謝に関与する酵素の性質については不明な点が多い。本研究では、アナンダミドを加水分解する酵素をブタ脳から単離精製し、その性質を明らかにすることを試みた。ブタ脳のミクロソーム画分を1%Triton X-100で処理して得られた可溶化蛋白を、Phenyl-5PW疎水性クロマトグラフィーで分離することにより、加水分解酵素を約20倍に部分精製した(比活性:0.37μmol/min/mg蛋白)。この酵素標品は、リノール酸、オレイン酸、パルミチン酸のエタノールアミドよりもアナンダミドと高い反応性を示した。既知のアミド加水分解酵素であるセラミダーゼやプロテアーゼの活性は、この酵素標品では検出されなかった。また、高濃度のエタノールアミン存在下では、逆にアラキドン酸とエタノールアミンの脱水縮合反応により、アナンダミドが生成した。クロマトグラフィー上での挙動、pH依存性、熱失活曲線、種々の阻害剤(アラキドニルトリフルオロメチルケトン、p-クロロメルクリ安息香酸、フルオロリン酸ジイソプロピル、フッ化フェニルメチルスルフォニル)の効果に基づいて、部分精製標品中のアナンダミド加水分解酵素活性とアナンダミド合成酵素活性は同一酵素蛋白に由来することが示唆された。

The structure of the receiver is composed of the internal and external components. In the case of cell stimulation, production and post-action, free acid, hydrolysis and inactivation are the main factors affecting metabolism and enzyme properties. In this study, we tried to clarify the nature of the enzyme by hydrolyzing it. The soluble protein and Phenyl-5PW were purified by 1% Triton X-100 and 20-fold partial purification of hydrolytic enzyme (specific activity:0.37μmol/min/mg protein). This enzyme marker is a highly reactive indicator of the presence of various enzymes such as citric acid, citric acid, and citric acid. It is known that the activity of the hydrolysis enzyme is not stable, and the enzyme standard is not stable. In the presence of high concentrations of these compounds, the reaction of dehydration and condensation of these compounds occurs. pH Dependence, Thermal Inactivation Curve, Species Resistance The enzyme activity of hydrolysis enzyme and enzyme activity of synthesis enzyme in some refined standard samples are related to the origin of the same enzyme protein.