肺癌の遺伝子治療のための腫瘍選択的発現アデノウイルスベクターの開発

用于肺癌基因治疗的肿瘤选择性表达腺病毒载体的开发

• 批准号: 07670668
• 负责人: 山木戸 道郎
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07670668/
• 关键词: 遺伝子治療; 肺癌; アデノウイルスベクター

方法CEA遺伝子蛋白翻訳開始点から-424から-2番目の塩基配列を含むDNAフラグメントを、LacZ遺伝子あるいはHSV-TK遺伝子と共にアデノウイルスベクターに組み込んだ.コントロールプロモーターとしてサイトメガロウイルス(CMV)プロモーターを用いた.各々AdCEALacZ、AdCEATKとAdCMVLaczと命名した.CEA産生癌細胞株VMRC-LCDR及びLoVoとCEA非産生癌細胞株HeLaをAdCELacZ、AdCMVLacZにより20moiで感染さえ、72時間後単位蛋白量あたりのσnitrophenol-β-D-galactosidase(ONPG)のgalactoseとchromophore σnitrophenolへの転換を測定した。各種細胞株を20moiでAdCEATKあるいはAdCMVLacZに感染させ、GCVを種々の濃度で添加、5日後、MTT法にて生存細胞数を計測した。AdCEATK感染細胞生存数のAdCMVLacZ(コントロールベクター)感染細胞生存数に対する比率を計算した。結果用いた全細胞株でCMVプロモーターによる非常に強いβ-ガラクトシダーゼ遺伝子の発現がみられ、3細胞株種間で差はなかった。しかしCEAプロモーターによる発現はCEA生産癌細胞株LoVoではCEA非産生性細胞株のHeLaよりも有意に強く(0.50±0.07vs0.15±0.03U/min/μg protein,p<0.05)、またVMRC-LCDではHeLaより強い傾向がみられた。培地中GCV濃度20μMでは感染細胞の生存率はLoVo55%に対してHeLaは73%でありLoVoにはHeLaよりもガンシクロビルに対して強い感受性が導入される傾向がみられ、今後されにin vivoでのGCV投与量、時期の検討が必要と考えられる。

Methods CEA gene protein translation start point: -424,-2, sequence: DNA sequence: LacZ gene, HSV-TK gene, total: DNA sequence: LacZ gene, HSV-TK gene. The first time I saw a girl, I saw a girl, and I saw a girl. Each of them was named AdCEALacZ, AdCEATK and AdCMVLacz. The CEA-producing cancer cell line VMRC-LCDR and LoVo and the CEA-non-producing cancer cell line HeLa were infected with AdCELacZ and AdCMVLacZ at 20moi. After 72 hours, the change of galactose and sigma nitrophenol-β-D-galactosidase(ONPG) in the unit protein amount was measured. AdCEATK was used to detect AdCMVLacZ infection, GCV concentration was used to detect the number of viable cells by MTT assay after 5 days. The ratio of AdCMVLacZ infected cells to AdCEATK infected cells was calculated. The results showed that the development of CMV in whole cell line was very strong, and the difference between three cell lines was very strong. CEA production was significantly higher in LoVo than in HeLa (0.50± 0.07 vs 0.15 ± 0.03 U/min/μg protein,p<0.05), and VMRC-LCD was significantly higher in HeLa (0.15 ± 0.03 U/min/μg protein). When GCV concentration was 20μM in culture, the survival rate of infected cells decreased from 55% to 73%.

项目成果

Y. Yamanishi, H. Mada etal.: "Specific growth inhibition of small-cell lung cancer cells by adenovirus vector erpressing antisanse C-Kit transcript" Japanese Joarnal of Cancer Research. (in press). (1996)

Y. Yamanishi、H. Mada 等人：“通过腺病毒载体表达反义 C-Kit 转录本对小细胞肺癌细胞的特异性生长抑制”，日本癌症研究杂志。