肢芽の未分化間充織細胞が合成するプロテオグリカン、PG-Mの構造と機能の解析

肢芽未分化间充质细胞合成的蛋白多糖PG-M的结构与功能分析

• 批准号: 07680661
• 负责人: 篠村 多摩之
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Aichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07680661/
• 关键词: 細胞間基質; プロテオグリカン; コア蛋白質; スプライシング; コンドロイチン硫酸; 機能ドメイン

プロテオグリカン、PG-Mのコンドロイチン硫酸鎖結合領域は、2つの大きなエクソン(3Kbと6Kb)によってコードされている。そしてこれらのエクソンは選択的スプライシングを受けることによって変化し、その結果コンドロイチン硫酸鎖結合領域のみを異にする4種類のコア蛋白質が形成される。つまりPG-Mには、コンドロイチン硫酸鎖の結合本数が異なる4種類のアイソフォームが存在する。そこでコンドロイチン硫酸鎖の数の違いに着目し、それぞれの分子の機能的差異を明らかにする目的で、動物細胞における各分子の発現とその局在について解析を行った。まず異なる分子形のヒトPG-Mコア蛋白質をコードするcDNAを種々のマウス培養細胞に導入して発現させ、本来マウス細胞が合成するPG-Mと新たに発現させたヒトPG-Mを免疫学的に区別することによって、それぞれのタイプのPG-Mの局在を比較解析した。尚、解析に必要なマウスPG-Mの各ドメインに対する特異抗体と、ヒトPG-Mを特異的に認識するモノクローナル抗体は、それぞれのcDNAをもとに大腸菌によって合成した融合蛋白質を用いて確立した。その結果、少なくともコンドロイチン硫酸鎖の存在の有無は、明らかにPG-M分子の存在様式に違いをもたらしていることが解ってきた。また同時にこの実験系において、ヒトPG-Mのコア蛋白質cDNAに変異を導入し、機能ドメインを一部改変してその影響を解析した。その結果、機能ドメインの変化はPG-Mの局在に対し、明らかな変化をもたらすことが確認された。このことは各ドメインが、少なくともPG-M分子の存在状態に対し重大な意味を持っていることを示している。

プ ロ テ オ グ リ カ ン, PG - M の コ ン ド ロ イ チ ン lock combining domain は sulfate, 2 つ の big き な エ ク ソ ン (3 KB と 6 KB) に よ っ て コ ー ド さ れ て い る. そ し て こ れ ら の エ ク ソ ン は sentaku of ス プ ラ イ シ ン グ を by け る こ と に よ っ て - し, そ の results コ ン ド ロ イ チ ン sulfuric acid combined with field lock の み を different に す る 4 kinds の コ ア protein が form さ れ る. つ ま り PG -m に は, コ ン ド ロ イ チ ン lock の sulfate combined with book が different な る 4 kinds の ア イ ソ フ ォ ー ム が exist す る. そ こ で コ ン ド ロ イ チ ン sulfuric acid number lock の の violations い に mesh し, そ れ ぞ れ の differences in function of molecular の を Ming ら か に す る purpose で, animal cells に お け る each molecule の 発 now と そ の bureau in に つ い analytical line を っ て た. ま ず different な る molecular shape の ヒ ト PG -m コ ア protein を コ ー ド す る cDNA を kind 々 の マ ウ ス culture cell に import し て 発 now さ せ, originally マ ウ ス cells が synthetic す る PG - M と new た に 発 now さ せ た ヒ ト PG - M を immunology に difference す る こ と に よ っ て, そ れ ぞ れ の タ イ プ の PG -m の bureau in を parsing Youdaoplaceholder0 た. Still, parse に necessary な マ ウ ス PG -m の each ド メ イ ン に す seaborne る と, specific antibody ヒ ト PG -m を specific に know す る モ ノ ク ロ ー ナ は ル antibody, そ れ ぞ れ の cDNA を も と に coliform に よ っ て synthetic し た fusion protein を い て establish し た. そ の results, less な く と も コ ン ド ロ イ チ ン sulfate lock の is の は, Ming ら か に PG の -m molecules exist others type に violations い を も た ら し て い る こ と が solution っ て き た. ま た simultaneously に こ の be 験 department に お い て, ヒ ト PG -m の コ ア protein cDNA に - different を import し, function ド メ イ ン を a change - し て そ の effect を resolution し た. そ の result, function ド メ イ ン の variations change は PG - M の bureau in に し seaborne, Ming ら か な variations change を も た ら す こ と が confirm さ れ た. こ の こ と は each ド メ イ ン が, less な く と も PG の -m molecules exist state に し major な mean を seaborne hold っ て い る こ と を shown し て い る.

项目成果

Shinomura, T. et al.: "The Gene Structure and Organization of Mouse PG-M, a Large Chondroitin Sulfate Proteoglycan: Genomic Background for the Generation of Multiple PG-M Transcripts." The Journal of Biological Chemistry. 270. 10328-10333 (1995)

Shinomura, T. 等人：“小鼠 PG-M（一种大型硫酸软骨素蛋白聚糖）的基因结构和组织：生成多个 PG-M 转录本的基因组背景。”

Zako, M. et al.: "Expression of PG-M(V3), an Alternatively Spliced Form of PG-M without a Chondroitin Sulfate Attachment Region in MOuse and Human Tissues." The Journal of Biological Chemistry. 270. 3914-3918 (1995)

Zako, M. 等人：“PG-M(V3) 的表达，这是一种没有硫酸软骨素附着区域的 PG-M 选择性剪接形式，在小鼠和人体组织中的表达。”

Ito, K. et al.: "Multiple Forms of Mouse PG-M, a Large Chondroitin Sulfate Proteoglycan Generated by Alternative Splicing." The Journal of Biological Chemistry. 270. 958-965 (1995)

Ito, K. 等人：“多种形式的小鼠 PG-M，一种通过选择性剪接生成的大型硫酸软骨素蛋白聚糖。”