肢芽の未分化間充織細胞が合成するプロテオグリカン、PG-Mの構造と機能の解析

肢芽未分化间充质细胞合成的蛋白多糖PG-M的结构与功能分析

• 批准号: 05680536
• 负责人: 篠村 多摩之
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Aichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05680536/
• 关键词: プロテオグリカン; cDNAクローニング; 肢芽; スプライシング

1.プロテオグリカン、PG-Mのコア蛋白質のカルボキシル末端領域には、Ca^<2+>依存性の動物レクチン様構造が存在する。この領域が糖結合活性を持つかどうか確認する目的でニワトリPG-Mのカルボキシル末端領域をコードするcDNAを発現ベクターに組み込み、大腸菌に導入して組み換え蛋白質を発現させた。糖結合活性はアフィニティーカラムを用いて解析し、その結果この蛋白質はガラクトースおよびマンノースと結合することが明らかとなった。更に同一の組み換え蛋白質を、動物細胞(COS細胞)を用いて発現させ、同様の糖結合活性があることを確認した。現在は、PG-Mのカルボキシル末端領域が結合する内在性のリガンドを同定する目的で研究を進めている。2.PG-Mの発現がどのような組織で見られるのかを検討する目的で、ノーザンブロット解析およびPolymerase chain reaction(PCR)を用いた解析を行った。その過程で、PG-Mのコア蛋白質をコードしているmRNAは、少なくとも4種類存在していることが明らかになった。それそれのmRNAの塩基配列を解析した結果、mRNAの多様性は選択的スプライシングの差に起因することが明らかになった。更に、選択的スプライシングの差は、すべてPG-M分子のコンドロイチン硫酸鎖結合領域の変化をもたらし、その結果PG-Mが持つコンドロイチン硫酸鎖の量は、スプライシングのパターンに依存して組織ごとに異なっていことが明らかになった。そこで現在、そうしたPG-Mの構造の差が、生理的にどのような意味を持つのか、解析を進めている。3.遺伝子ターゲッティング法によるPG-M遺伝子の破壊を目的とした研究は、現在相同組み換えを起こしたES細胞を選別している段階であり、平成6年度中に変異体マウスの作成を完了したい。

1. The existence of Ca ^<2 +>-dependent animal protein structure in the terminal domain of PG-M protein. This domain has a sugar binding activity that can be identified by PCR. This domain has a terminal domain that can be identified by PCR. The sugar binding activity was analyzed and the protein binding activity was determined. In addition, the same group of proteins and animal cells (COS cells) were detected and the same carbohydrate binding activity was confirmed. At present, PG-M's structure and terminal field are combined to study the intrinsic structure and stability of PG-M. 2. PG-M discovery and analysis of polymerase chain reaction (PCR) There are four kinds of PG-M protein in the process, and there are four kinds of PG-M protein in the process. The results of the analysis of the mRNA base alignment, the diversity of the mRNA base alignment and the causes of the differences are clear. In addition, the difference between the selected species and the PG-M molecule is different from that between the PG-M molecule and the PG-M molecule. As a result, the PG-M molecule maintains the amount of the PG-M molecule. The structure difference of PG-M, the physiological meaning, the analysis and the progress. 3. The study of PG-M gene expression in the same group of ES cells was completed in 2006.

项目成果

Yamagata,M.et al.: "Tissue variation of two large chondroitin sulfate proteoglycans (PG-M/versican and PG-H/aggrecan)in chick embryos" Anatomy and Embryology. 187. 433-444 (1993)

Yamagata,M.et al.：“鸡胚中两种大硫酸软骨素蛋白聚糖（PG-M/多功能蛋白聚糖和 PG-H/聚集蛋白聚糖）的组织变异”解剖学和胚胎学。

Shinomura,T.et al.: "cDNA cloning of PG-M.a large chondroitin sulfate proteoglycan expressed during chondrogenesis in chick limb bunds" The Journal of Biological Chemistry. 268. 14461-14469 (1993)

Shinomura,T.et al.：“PG-M 的 cDNA 克隆。一种大型硫酸软骨素蛋白多糖，在鸡肢软骨形成过程中表达”《生物化学杂志》。