葉緑体DNAの修復機構

叶绿体DNA修复机制

• 批准号: 15651021
• 负责人: 八木 孝司
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Osaka Prefecture University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15651021/
• 关键词: DNA修復; 葉緑体; リアルタイムPCR; ユーグレナ; PCR

本課題ではまず、培養したユーグレナを種々の変異原で処理し、細胞中に異なる種類のDNA損傷を生じさせる。次いでDNA修復のために一定時間培養する。最後に、葉緑体・ミトコンドリア・核にそれぞれ特異的な遺伝子を標的に定量的PCRを実施し、目的遺伝子がどれだけ増幅されたかで損傷がどの程度治されたかを、オルガネラごとに推定する。前年度までにユーグレナ(Euglena gracilis)の培養環境を整備し培養条件を確立した。また当初の予定では、RIを用いた定量的PCRを実施する予定であったが、簡便で電気泳動不要、更によりよい再現性が得られるリアルタイムPCR法を採用することにした。本年度は、リアルタイムPCRシステム(Cepheid社製Smartcycler II System)を用いてCyberGreen法により各オルガネラに特異的な遺伝子を定量した。まず、α-tublin1(核遺伝子)、rbcL(葉緑体遺伝子)、COXI(ミトコンドリア遺伝子)に特異的なそれぞれ約80bps領域を増幅するリアルタイムPCR用プライマーを設計した。ユーグレナから精製した全DNAを鋳型にリアルタイムPCRを行い、各遺伝子それぞれ単一のPCR産物が得られることを確認した。また鋳型を段階希釈し、各遺伝子についての検量線を作成した。次いで、紫外線照射したDNAを鋳型にリアルタイムPCRを実施した。しかしながらUV線量依存的なPCRシグナルの減少はみられず、本条件ではDNA修復の度合いを定量できるとは言えなかった。そこでPCR増幅する領域を80bpsから300bpsに拡大し、同様の実験を行ったところ、UV線量依存的なPCRシグナルの減少が見られた。このため本条件でDNA修復能の定量を実施中である。

This project aims at the development of DNA damage in different species in culture, treatment of xenogenes and cell culture. The second step is to cultivate the DNA for a certain period of time. Finally, the chloroplast DNA sequence was analyzed by quantitative PCR, and the target DNA sequence was amplified. The cultivation environment of Euglena gracilis was prepared and the cultivation conditions were established in the previous year. The PCR method is simple and reproducible. This year, the Cyber Green method was used to quantify the specific genes of each gene. Specific PCR primers for DNA, α-tublin1(nuclear gene), rbcL(chloroplast gene), COXI(DNA fragment) were designed for amplification in the 80bps domain. The PCR products of the complete DNA were purified and confirmed. For example, if you want to create a model, you need to create a model line for each component. In addition, ultraviolet irradiation and DNA sequencing were carried out. DNA repair is quantified under these conditions. The PCR amplification range is from 80bps to 300bps. The PCR amplification range is from 80 bps to 300 bps. The DNA repair function can be quantified under these conditions.

项目成果

Identification of three major DNA adducts formed by the carcinogenic air pollutant 3-nitrobenzanthrone in rat lung at the C8 and N2 position of guanine and at the N6 position of adenine

• DOI: 10.1002/ijc.21622
• 发表时间: 2006-05-01
• 期刊: INTERNATIONAL JOURNAL OF CANCER
• 影响因子: 6.4
• 作者: Arlt, VM;Schmeiser, HH;Takamura-Enya, T
• 通讯作者: Takamura-Enya, T

Developments in Mutation Research

突变研究的进展

• 发表时间: 2006
• 作者: Volker.M.Arlt;Masanobu Kawanishi
• 通讯作者: Masanobu Kawanishi