ダイオキシン感受性の動物種差が生じる機構の解明と種差を反映するアッセイ法の開発

阐明造成二恶英敏感性物种差异的机制并开发反映物种差异的测定方法

• 批准号: 14042258
• 负责人: 八木 孝司
• 金额: $ 2.69万
• 依托单位: Osaka Prefecture University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14042258/
• 关键词: 環境ホルモン; 内分泌撹乱物質; アリルハイドリカーボン受容体; ダイオキシン; レポーターアッセイ; リスク評価; 多環芳香族炭化水素; アリルハイドロカーボン受容体

ダイオキシンや多環芳香族炭化水素類のヒトや種々の動物細胞への作用を簡便に比較するため、種々の齧歯類動物のAhRおよびArntをクローニングしてヒトのものと構造を比較し、さらにそれらの遺伝子の活性化を比較測定できる酵母レポーターアッセイ系を構築するととを目指した。ゴールデンハムスター、モルモットの肺組織よりRNAを抽出しRT-PCR法によってAhrおよびArnt cDNAを増幅し、その塩基配列を決定した。cDNAからわかったアミノ酸配列によれば、ヒト、マウス、ゴールデンハムスター、モルモットのAhrは互いに、中央よりN末側で非常に相同性が高く、C末側で相同性が低かった。ゴールデンハムスターAhrのC末側Q-rich領域にはくり返し構造があり、Q-rich領域が他の種に比べて約2.2倍長くなっていた。クローン化したArnt cDNAからわかったアミノ酸配列は、4種間で相同性が高かった。ヒト、マウス、ゴールデンハムスター、モルモットのそれぞれAhrとArntとを発現し、ダイオキシンや多環芳香族炭化水素類を検出できる酵母アッセイ系を樹立した。種々の芳香族多環炭化水素(β-ナフトフラボン、2,3,7,8-テトラクロロジベンゾダイオキシン(TCDD)、ベンゾピレン、インディルビン、3-メチルコラントレン)のAhr/Arnt系活性化を測定・比較した。いずれの物質による活性化も定常レベルの500〜900倍となり、アッセイ系が効率良く働くことがわかった。インディルビンとTCDDによる活性化はモルモット>マウス=ヒト>ゴールデンハムスターの順に強かった。この順序は動物個体のTCDD感受性の順序と一致した。このことは動物のダイオキシン類感受性がそれぞれのAhr系活性化の大きさに依存することを示唆する。

Comparison of the effects of polyaromatic hydrocarbons on animal cells and the structure of polyaromatic hydrocarbons in rodents; comparison of the activity of polyaromatic hydrocarbons; and comparison of the structure of polyaromatic hydrocarbons. RNA was extracted from lung tissue by RT-PCR, and the amplification and sequence of Arnt cDNA were determined. The cDNA The Q-rich domain is about 2.2 times longer than the Q-rich domain. Arnt cDNA is highly homologous among the four species. The yeast system is established by the discovery of polyaromatic hydrocarbons, such as aromatic hydrocarbons, aromatic hydrocarbons and aromatic hydrocarbons. Determination and comparison of Ahr/Arnt system activation of aromatic polycyclic hydrocarbon (β-CDD, 2,3,7,8-CDD, TCDD). The active substance in the medium is 500 ~ 900 times higher than the active substance in the medium. TCDD is active and active. The order of TCDD susceptibility of individual animals is consistent. The animal's sensitivity is dependent on the activation of the gene.

项目成果

Sonoda, Eiichiro: "Multipleroles of Rev3, the catalytic subunit of polξ in maintaining genome stability in vertebrates"The EMBO Journal. 22・12. 3188-3197 (2003)

Sonoda, Eiichiro：“Rev3 的多重作用，pol β 的催化亚基在维持脊椎动物基因组稳定性方面的作用”《EMBO 杂志》22・12（2003 年）。

Aki Nakayama: "Oxidative damage and inutation induced by benzene matabolites"JSPS-VCC, Environmental Toxicity Evalutation and Risk Management. 1. 40-49 (2003)

Aki Nakayama：“苯代谢物诱导的氧化损伤和突变”JSPS-VCC，环境毒性评估和风险管理。

Kawanishi, Masanobu: "Construction of mouse aryl hydrocarbon receptor ligand activity"Mutation Research. 540. 99-105 (2003)

Kawanishi, Masanobu：“小鼠芳烃受体配体活性的构建”突变研究。

八木孝司: "酵母を用いた哺乳動物の多環芳香族炭化水素応答系の構築"環境変異原研究. 25・2. 61-67 (2003)

Takashi Yagi：“利用酵母构建哺乳动物多环芳烃反应系统”环境诱变剂研究25・2（2003）。

Totsuka, Yukari: "Analysis of HPRT and supF mutations caused by pierisin-1, a guanine specific ADP-ribosylating toxin derived from the cabbage butterfly"Chemical Research in Toxicology. 16・8. 3188-3197 (2003)

Totsuka，Yukari：“来自菜粉蝶的鸟嘌呤特异性 ADP 核糖基化毒素 Pierisin-1 引起的 HPRT 和 suF 突变的分析”毒理学化学研究 16・8 (2003)。