ウニ胚細胞系譜特異的発現遺伝子の空間的発現調節を司るシスエレメントの研究

海胆胚胎细胞谱系特异性表达基因空间表达调控顺式元件研究

• 批准号: 04640660
• 负责人: 赤坂 甲治
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04640660/
• 关键词: 転写調節; 細胞系譜; 初期胚; シスエレメント

この研究ではウニ胚の反口側外胚葉に特異的に発現するArs遺伝子の細胞系譜特異的発現調節を担うシスエレメントの特定化を試みた。Ars遺伝子の転写調節領域(転写開始点から-3kbとエンハンサー活性を持つ第3イントロンの断片)とリポーター(CAT)との融合遺伝子を構築し、これを卵に注入して発生させ、抗CAT抗体で融合遺伝子の空間的発現パターンを検出した。その結果、内在性Ars遺伝子同様の反口側外胚葉特異的なCATの発現が見られた。したがって、融合遺伝子構築に用いたArs遺伝子の転写調節領域内に反口側外胚葉特異的な発現を担うエレメント存在することが示された。Ars遺伝子上流には3本鎖DNA構造をとり得る特徴的な約1kbのホモピリミジン領域が存在する。この領域ではヌクレオソーム構造をとらないと考えられ、転写調節への関与が強く示唆される。この領域を欠失させた融合遺伝子の発現パターンを調ベたところ、細胞系譜特異的発現に乱れが生じ、内胚葉、間充織細胞でも発現がみられた。したがって、このホモピリミジン領域に細胞系譜特異的な発現調節を受けるのに必要なエレメントが存在することが示された。現在、さらに詳細な欠失、変異をこの領域に与え、細胞系譜特異的発現調節を担うエレメントの特定化を急いでいる。一方、我々はこの領域に、別の遺伝子(ウニの細胞質性アクチンCyIIIa遺伝子)で細胞系譜特異的発現に必要と考えられているP3AサイトやGストリングが存在する事を、フットプリント法を用いて示しており、これらのサイトをリガンドとしたアフィニティークロマトグラフィーによって転写因子の精製を行っている。Gストリング結合因子に関しては、発現cDNAライブラリーをサウスウェスタン法によりスクリーニングする事により、4種類のcDNAをクローニングしており、その塩基配列を解析している。

This study attempts to regulate the development of cell lineage-specific genes in the anti-oral ectoblast of embryos. Ars gene expression regulatory domain (expression start point: -3kb; expression activity: 3rd fragment), CAT gene expression domain, CAT antibody expression domain, CAT gene expression domain, CAT gene expression domain. As a result, the occurrence of CAT, which is specific to the anterolateral ectoblast and the same as that of intrinsic Ars gene, has been observed. In the domain of gene regulation, the expression of antistomal ectoblast-specific genes is a concern for the existence of fusion genes. An approximately 1kb mobile computing domain characterized by a 3-plex DNA structure exists upstream of the Ars gene. This domain is composed of two parts: one part is composed of three parts: one part The development of fusion genes in this domain is not only related to cell lineage, but also related to endoderm and mesenchymal cells. The cell genealogical expression regulation in the field of cell biology is necessary for the expression of the gene. Now, there is a lack of detail, variation, and regulation of cell genealogy-specific development. On the one hand, in this field, other genes (the cytoplasmic Acronin CyIIIa gene) are necessary and examined for the development of cell pedigree specific genes. However, the existence of P3A servers and G-station links is demonstrated by the use of the white space method, and the servers are refined by the use of writing factors. 4 kinds of cDNAs were analyzed for their binding factors and their nucleotide sequences.

项目成果

K.Mitunaga,M.Kanda,K.Yamazaki,H.Kawashita,K.Akasaka,I.Yasumasa: "Expression of Na^+,K^+-ATPase α-Subuwit in Amimalized and Vegatalized Embryos of the Sea Urdnin,Hemi cuntrotus pul chanimus." Devclop.Growth & Ditter.,. 34. 677-684 (1992)

K. Mitunaga、M. Kanda、K. Yamazaki、H. Kawashita、K. Akasaka、I. Yasumasa：“Na^+、K^+-ATPase α-Subuwit 在海 Urdnin、Hemi 的 Amimalized 和 Vegatalized 胚胎中的表达cuntrotus pul chanimus。” Devclop.Growth & Ditter.,. 34. 677-684 (1992)

K.Yamada,S.Eguchi,T.Yamamoto,K.Akasaka,H.Shimada: "Cis-Acting Elements for Proper Ontogenic Expression of Arylsulfacese Gene of Sea Urchin Embryo" Devclop.Growth & Ditter.,. 34. 719-729 (1992)

K.Yamada、S.Eguchi、T.Yamamoto、K.Akasaka、H.Shimada：“海胆胚胎芳基硫醚酶基因正确个体发育表达的顺式作用元件” Devclop.Growth

赤坂 甲治,山田 一実,嶋田 拓: "ウニ初期発生における遺伝子発現の制御" 生化学. 64. 485-502 (1992)

Koji Akasaka、Kazumi Yamada、Taku Shimada：“海胆早期发育过程中基因表达的控制”生物化学 64. 485-502 (1992)。