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細胞外基質としてのアリールスルファターゼ機能の解析

芳基硫酸酯酶作为细胞外基质的功能分析

基本信息

批准号：
14658239
负责人：
赤坂甲治
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

アリールスルファターゼ(Ars)遺伝子ファミリーの発現異常は、さまざまな疾患をもたらす。したがって、Arsは生命活動に重要な役割を果たしていると予想される。しかし、生体内の基質は不明であり、その分子機構は全く解明されていなかった。我々は、これまでの研究で、ウニ胚では酵素としてではなく、形態形成運動の足場として機能していることを見いだしており、当該研究では細胞外基質としてのArsという観点で、哺乳動物における以下の機能解析を行った。(1)酵素活性ではなく、Arsタンパク質の実体を検出する目的で、マウスおよびラットのArs-A、Ars-Bに対する特異抗体を作製した。(2)これらの抗体を用い、肝臓におけるArs-A、Ars-Bの存在様式を調べたところ、肝実質細胞および血管内皮細胞ともに、両ArsともArsタンパク質の大部分は細胞表層に存在することが明らかになった。一方、人工基質に対する酵素活性は細胞内に局在していた。(3)抗ヘパラン硫酸抗体で、二重染色を行ったところ、ヘパラン硫酸の分布と一致することが明らかになり、細胞表層においてヘパラン硫酸とともに細胞外基質として機能することが強く示唆された。我々は、ウニ胚ではArsがOtxにより直接調節を受けていることを示している。また、4.5〜6.5日マウス胚では内胚葉が前方へ移動するが、Otx2ノックアウトマウスではその移動が妨げられることが報告されている。そこで、(4)マウス胚におけるArsの発現を検出したところ、顕著な発現が見られ、マウス胚においてもArsがOtxに支配され、形態形成運動にかかわる可能性が示唆された。

The problem is that there is no way to prevent it. Ars are important to life. The matrix in the organism is unknown, and the molecular mechanism is completely understood. The study of enzyme and function of morphogenesis and movement was carried out in mammalian cells. (1)Enzyme activity is controlled by specific antibodies to Ars-A and Ars-B. (2)Ars-A and Ars-B are present in most of the cell surface layers of liver cells and vascular endothelial cells. The enzyme activity of one side and artificial substrate is in the middle of the cell. (3)Anti-H2SO4 antibody, double staining, consistent distribution of H2SO4, strong expression of H2SO4 in cell surface I'm not going to be able to do that. 4. 5 ~ 6. 5 days ago, the embryo was moved forward by the endoblast, Otx2 was moved forward by the embryo, and the embryo was moved forward by the endoblast. (4) The possibility of the occurrence of Ars is shown by the occurrence of Ars, which is dominated by Otx and morphogenesis.