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クロマチン構造・DNA高次構造レベルの初期発生遺伝子発現調節機構に関する研究

染色质结构和DNA高阶结构水平的早期发育基因表达调控机制研究

基本信息

批准号：
05680642
负责人：
赤坂甲治
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.マイクロコッカルヌクレーアーゼ感受性を指標にして、発生過程を追ってクロマチン構造の変化を調べた。その結果、以下のことが明らかになった。(1)転写開始前から転写時期にかけて、転写開始点から約0.5kb上流までの幅広い範囲にわたってヌクレオソーム構造をとっておらず、転写している組織が限定されてくる時期、すなわち転写を終結した細胞が現れる時期にはヌクレオソーム構造をとる。(2)0.5kbより上流はヌクレオソーム構造をとっているが、-2.5kb〜-2.3kbでは発生過程を通じて400塩基のバンドはみられたがヌクレオソーム構造の基本である200塩基のバンドがみられなかった。この領域にはTopIIの認識サイトとそれに続くAT-richな配列があることから、この部分で核マトリクスに結合しているものと考えられた。2.DNAの高次構造を認識して結合するタンパク質性因子のcDNAをサウスウエスタン法によりクローニングした。Ars遺伝子の上流-2.0kb〜-1.5kbには片側鎖がホモピリミジンの領域があり、3本鎖DNA構造をとる可能性が示唆されている。この領域に結合する因子をクローニングするるために合成ポリdG-dCをプローブとしてサウスウエスタン法によりウニ原腸胚λgt11発現ライブラリーをスクリーニングしたところ、4個のクローンが得られた。アミノ酸配列は酸性アミノ酸のAspまたはGluと塩基性アミノ酸のLysまたはArgの繰り返しがあり、U1RNPの一部と高い類似性があった。これらの因子が3本鎖DNA構造を認識して結合する可能性があるので、確認を急いでいる。3.Xenopus oocyteの中でクロマチンを再構成させ、遺伝子を発現させた。

1. マイクロコッカヌクレーアーゼsensitivity index にして, 発生 Process を Chase ってクロマチンconstruct の剉化を Adjustment べた.そのRESULTS、The following のことが明らかになった. (1) Before the start of writing, the writing period and the starting point of writing are about 0.5kb.っておらず、転写しているorganizationがlimitedされてくる Period、すなわち転WRITE をEnd したCell がNow れる Period にはヌクレオソームSTRUCTURE をとる. (2)0.5kb はヌクレオソームstructural をとっているが、-2.5kb～-2.3kb では発生 Processを通じて400婩码のバンドはみられたがヌクレオソームThe basic structure of the structure is 200塩本のバンドがみられなかった.この区にはTopIIのKnowledgeサイトとそれに続くAT-richな配arrayがあることから、このpart of the core マトリクスにcombination of しているものと卡えられた. 2. The higher-order structure of DNA is understood and combined with the qualitative factor of cDNA. Ars 缝子の上流-2.0kb~-1.5kbには片 Side locks がホモピリミジンの区があり, 3 locks DNA structure をとるpossibility がshows souce されている. The combination of the field and the factor of the field Synthetic ポリdG-dC をプローブとしてサウスウエスタン法によりウニGastrula λgt11発成ライブラリーをスクリーニングしたところ、4個のクローンが得られた。 Aminic Acid Coordination Acidic Aminic Acid Asp Asp Glu and Basic Aminic Acid Ly sまたはArgの缲り回しがあり, U1RNPの一一と高いsimilarityがあった.これらのfactorが3this lockDNA structureをKnowingしてcombinationするpossibilityがあるので、confirmationいでいる. 3.