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ウニ・アリールスルファターゼ遺伝子の反口側外胚葉特異的発現を司る分子機構

海胆芳基硫酸酯酶基因未分化外胚层特异性表达的分子机制

基本信息

批准号：
08680795
负责人：
赤坂甲治
金额：
$ 1.66万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08680795/
关键词：
ウニアリールスルファターゼ遺伝子 Otx

项目摘要

我々が以前に行ったゲルシフト分析から、ウニ・アリールスルファターゼ(HpArs)遺伝子のエンハンサーに結合する転写活性化因子Otxは初期型と後期型があることが示されていたが、今年度の研究では初期型OtxEと後期型OtxLの2種類のcDNAをクローニングすることに成功した。これら2種類のOtxタンパク質のアミノ酸配列は、ホメオドメインを含めてホメオドメインからC末端まではまったく同じで、ホメオドメインよりN末端が異なっていた。次に、Otxタンパク質の機能を探るために強制発現の実験を行った。初期型OtxEのmRNAを受精卵に顕微注入し、OtxEを過剰発現させた胚では、HpArs遺伝子の転写活性化は起こらなかったが、すべての細胞が反口側外胚葉になった。OtxLを過剰発現させた胚では、HpArs遺伝子の転写が活性化した。この結果から、OtxEは細胞運命を決定する機能をもち、OtxLは転写活性化因子であることが明らかになった。OtxE、OtxLの空間的発現パターンをin situハイブリダイゼイションにより解析したところ、OtxEは卵割期には胚全体で、胞胚期には植物極盤で発現しており、以降消失した。OtxLは胞胚期から間充織細胞を除く胚のすべての細胞で発現が見られた。OtxLの時間的、空間的発現パターンはHpArs遺伝子の発現領域をすべて包含していることから、転写活性化因子である可能性が示唆された。しかし、完全には一致していないので、反口側外胚葉特異的に転写を活性化する機構には、他の因子が必要であることが明らかになった。遺伝子発現調節のカスケードを遡るために遺伝子をクローリングしたところ、初期型、後期型のOtxはともに一種類のOtx遺伝子の転写産物で、転写開始点とスプライシングサイトを変えることで2種類のOtxが合成されることが明らかになった。

I used to do the analysis of ったゲルシフトから、ウニ・アリールスルファターゼ( HpArs) The initial stage of the activating factor Otx in combination with HpArs The late-stage model, the late-stage model, the early-stage model OtxE The 2 types of late-type OtxL cDNA were successfully tested.これら2 kinds of のOtxタンパク性のアミノacid formula は、ホメオドメインをcontaining めてホメオドメインからC-terminal まではまったく同じで, ホメオドメインよりN-terminal がdifferent なっていた. Seconds, Otxタンパク性のfunctionalityをExplorationるためにforced appearanceの実験を行った. Early-stage OtxE is a fertilized egg that is microinjected into a fertilized egg. The pArs genetic code is activated and activated, and the cells of the pArs are activated and activated. OtxL has passed the test, and HpArs has been activated.このRESULTS から、OtxE はFate をdetermination するFUNCTION をもち、OtxL は転WRITE ACTIVATING FACTORS であることが明らかになった. The appearance of OtxE and OtxL spaces situハイブリダイゼイションによりanalyticsしたところ、OtxEはEG During the cutting stage, the whole embryo is gone, and at the embryonic stage, the pole plate of the plant appears and then disappears. OtxL is in the embryonic stage and the mesenchymal cells are removed and the cells in the embryo appear. OtxL's time and space's appearance of time and space HpArs's remaining areaすべて includes していることから, and the 転WRITING activation factor である possibility が时憆された.しかし、Completely consistent していないので、Anti-oral side ectoderm-specific に転写をActivation mechanism is necessary, and other factors are necessary. The remaining items are now adjustedグしたところ, early type, late type のOtx はともに a type of のOtx The product of the legacy and the starting point of the writing are the product and the starting pointえることで2 kinds of のOtxがsynthetic されることが明らかになった.