IL-2受容体新らたなサブユニットr鎖の機能解析

新IL-2受体亚基r链的功能分析

基本信息

批准号：
04670283
负责人：
竹下敏一
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

IL-2はT細胞を初め種々のリンパ球やマクロファージの増殖・分化因子であり、その作用は細胞表面のIL-2受容体に特異的に結合することにより発揮される。従って、IL-2作用機序を明らかにするには、IL-2受容体のサブユニット構造とそれらの機能を解析する必要がある。我々は、すでに、機能的なIL-2受容体には、従来から知られているα鎖・β鎖サブユニットに加え、第3のサブユニットγ鎖(p64)が付随していることを明らかにしてきた。本研究では、γ鎖の遺伝子を単離し、機能的IL-2受容体構築におけるγ鎖の役割を明らかにした。β鎖を導入したヒトT細胞株、MOLTβを用い、IL-2存在下でβ鎖と共沈してくるγ鎖を二次元電気泳動で精製し、γ鎖のアミノ酸配列の一部を決めた。それをもとにPCR法でプローブを作製し、γ鎖cDNAを単離した。塩基配列が推測されるγ鎖蛋白は、シグナルペプチドと膜貫通領域を1つづつもち、成熟分子は347このアミノ酸よりなる。γ鎖はアミノ末端に4個のCysを持ち、膜貫通部位に近いところにTrp-Ser-x-Trp-SerからなるWXモチーフをもつ典型的なサイトカイン受容体スーパーファミリーに属す分子である。γ鎖の発現は血球系細胞に限局しており、線維芽細胞には発現していない。γ鎖を含むIL-2受容体サブユニット分子を線維芽細胞に導入する実験から、高親和性受容体はα・β・γ鎖のヘテロ三量体からなり、中親和性受容体はβ・γ鎖のヘテロ二量体であることが明らかとなった。IL-2のインターナリゼーション、IL-2刺激によるチロシン・キナーゼの活性化、核内転写因子の転写促進は高親和性・中親和性受容体により伝達され、γ鎖はβ鎖とともに機能的なIL-2受容体に必須の分子であることを明らかにした。

IL-2是T细胞的增殖和分化因子，包括各种淋巴细胞和巨噬细胞，其作用是通过特异性结合与细胞表面上的IL-2受体来施加的。因此，为了阐明IL-2作用的机制，有必要分析IL-2受体的亚基结构及其功能。我们已经表明，功能性IL-2受体还伴有第三个亚基伽马链（P64），此外还有传统已知的α链和β链亚基。在这项研究中，我们分离了伽马链基因，并揭示了伽马链在构建功能性IL-2受体中的作用。使用已与β链引入的人T细胞系Moltβ，在IL-2存在下与β链相结合的γ链通过二维电泳纯化γ链以确定γ链的氨基酸序列的一部分。基于此，通过PCR制备了探针，并分离了γ链cDNA。估计碱基序列的伽马链蛋白具有一个信号肽和一个跨膜区域，成熟的分子由347个氨基酸组成。伽马链是属于典型的细胞因子受体超家族的分子，在氨基末端有四个Cys，一个由TRP-SER-X-TRP-SER组成的WX基序附近的WX基序。伽马链的表达位于血细胞系，并未在成纤维细胞中表达。将含有伽马链的IL-2受体亚基分子引入成纤维细胞中的实验表明，高亲和力受体由α，β和γ链的异光三聚体组成，并且培养基受体受体是β，γ链的异二聚体。 IL-2内在化，通过IL-2刺激激活酪氨酸激酶的激活以及核转录因子的转录促进是通过高亲和力，中等亲和力受体传播的，并揭示了γ链与β链是功能IL-2受体的基本分子。