生体内の情報に基づいたHIVウイルス特異的T細胞の試験管内再構築法の確立

基于体内信息的HIV病毒特异性T细胞体外重建方法的建立

• 批准号: 13226026
• 负责人: 山本 一彦
• 金额: --
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13226026/
• 关键词: HIV; T細胞クローン; T細胞レセプター; レトロウイルス; 遺伝子治療

HIVウイルスに対する生体内の免疫応答をリアルタイムでとらえ、そのT細胞レセプターの遺伝子情報を獲得し、効率良くリンパ球に遺伝子導入する技術を中心とした、ウイルス特異的T細胞再構築システムの確立を目的とした研究を進めた。本研究は免疫担当細胞の抗原レセプターを操作することによりエイズ治療が可能であることを示そうとするものであり、従来の方法論とは全く異なった新たな基盤技術を提供するものと期待出来る。我々がすでに樹立しているRT-PCRとSSCP法を組み合わせたT細胞のクロナリテイ検出システムでは、ダイナミックに変化する抗原特異的T細胞クローンの動きをリアルタイムで検出することが可能なことが種々の疾患で判明している。そこで、今年度は1)T細胞クロノタイプ検出システムによるHIVエピトプ反応T細胞クローンの絞り込み、2)リンパ球内でのTCRの情報のペアリング技術の確立、3)T細胞に効率良く遺伝子導入可能なシステムの確立などの研究を行った。すなわち、既に判明しているHIVエピトープのペプチドをパルスした樹状細胞の投与に対して、マウスの生体内で惹起されているT細胞クローンを検出し、その細胞で使われているT細胞レセプターのα、β鎖の全長cDNA情報を獲得し、レトロウイルスベクターに組み込むことを試行している。細胞内での2つのmRNAの情報をペアリングする技術に関しては、種々の方法を試みた結果、単一細胞分離法がもっとも再現性よくペアリングが可能であることを見いだした。また、T細胞に効率よく遺伝子導入可能なベクターはレトロウイルスベクターであることも判明した。

HIV ウ イ ル ス に す seaborne る の born the body immune 応 answer を リ ア ル タ イ ム で と ら え, そ の t-cell レ セ プ タ ー の heritage 伝 child intelligence を し, good working rate く リ ン パ ball に posthumous son 伝 import す る を center と し た, ウ イ ル ス specific T cells to construct シ ス テ ム の establish を purpose と し を た research into め た. This study bear は immune cells の antigen レ セ プ タ ー を operation す る こ と に よ り エ イ ズ が treatment can で あ る こ と を shown そ う と す る も の で あ り, 従 to の methodology と は く all different な っ た new た な base plate technical を す る も の る と look forward to. I 々 が す で に set し て い る rt-pcr と SSCP method を group み close わ せ た t-cell の ク ロ ナ リ テ イ 検 out シ ス テ ム で は, ダ イ ナ ミ ッ ク に variations change す る antigen specific T cells ク ロ ー ン の dynamic き を リ ア ル タ イ ム で 検 out す る こ と が may な こ と が kind 々 の disorders で.at し て い る. そ こ で, our は "1) T cells ク ロ ノ タ イ プ 検 out シ ス テ ム に よ る HIV エ ピ ト プ anti 応 t-cell ク ロ ー ン の ground り 込 み, 2) リ ン パ ball inside で の TCR の intelligence の ペ ア リ ン グ の established technology, 3) T cells に sharper rate good く heritage 伝 son import may な シ ス テ ム の establish な ど の を line っ た. す な わ ち, both に.at し て い る HIV エ ピ ト ー プ の ペ プ チ ド を パ ル ス し た dendritic cells の cast with に し seaborne て, マ ウ ス の born in vivo で provoked さ れ て い る t-cell ク ロ ー ン を 検 し, そ で の cells make わ れ て い る t-cell レ セ プ タ ー の alpha, beta, lock の full-length cDNA intelligence を し, レ ト ロ ウ イ ル ス ベ ク タ ー The に group み込む み込む とを とを is piloting the て る る. Intracellular で の 2 つ の mRNA の intelligence を ペ ア リ ン グ す る technology に masato し て は, kind of 々 の way を try み た results, 単 a cell separation が も っ と も reproducibility よ く ペ ア リ ン グ が may で あ る こ と を see い だ し た. ま た, T cell に sharper rate よ く heritage 伝 son import may な ベ ク タ ー は レ ト ロ ウ イ ル ス ベ ク タ ー で あ る こ と も.at し た.

项目成果

Misaki Y.: "Gene-transferred oligoclonal T cells predominantly persist in peripheral blood from an adenosine deaminase deficient patient during gene therapy."Molcular. Therapy. 3. 24-27 (2001)

Misaki Y.：“在基因治疗期间，基因转移的寡克隆 T 细胞主要存在于腺苷脱氨酶缺陷患者的外周血中。”分子。

Kawahata K.: "Peripheral tolerance to a nuclear autoantigen : dendritic cells expressing a nuclear autoantigen lead to persistent anergic state of CD4 autoreactive T-cells after proliferation"J. Immunol.. (in press).

Kawahata K.：“对核自身抗原的外周耐受：表达核自身抗原的树突状细胞导致增殖后 CD4 自身反应性 T 细胞持续无反应状态”J.

Hagiwara K.: "Identification of genes upregulated in the inflamed colonic lesions of crohns disease"Biochem. bioph. res. co.. 283. 130-135 (2001)

Hagiwara K.：“克罗恩病发炎结肠病变中上调基因的鉴定”Biochem。

Yamamoto K.: "T cells and autoimm disease"Allergy International. 50. 1-4 (2001)

Yamamoto K.：“T 细胞和自身免疫性疾病”过敏国际。

Yamada R.: "Association between a single-nucleotide polymorphism in in the promoter of the human interleukin-3 gene and rheumatoid arthritis in Japanese patients, and maximum-likelihood estimation of combinatorial effect of two genetic loci on susceptibil

Yamada R.：“人类白细胞介素 3 基因启动子中的单核苷酸多态性与日本患者的类风湿性关节炎之间的关联，以及两个遗传位点对易感性的组合效应的最大似然估计