权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

急速凍結・ディープエッチング法による赤芽球分化過程における膜骨格の研究

快速冷冻深度蚀刻法研究成红细胞分化过程中的膜骨架

基本信息

批准号：
06670016
负责人：
大野伸一
金额：
$ 1.09万
依托单位：
山梨医科大学
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06670016/
关键词：
赤芽球膜骨格急速凍結技法ディープエッチング法

项目摘要

赤血球膜細胞質側にはスペクトリンがアクチン、バンド4・1などと結合して網目状構造を形成している。さらにこの構造は細胞膜脂質二重層を貫通しているバンド3やグリコフォリンに結合して、赤血球膜を安定化していると考えられている。そこで赤芽球膜細胞質側を分子レベルの高解像力で三次元的に解析することができる急速凍結・ディープエッチング法を開発し、さらに膜骨格蛋白の抗体を作成し、超微形態学的に検索した。1.赤芽球内可溶性蛋白質除去法:(1)グルタールアルデヒドとアミノプロピルトリエトキシシランを被覆した2枚のカバーグラス間で赤芽球をはさみ二分割した。(2)一部の試料は2%パラフォルムアルデヒドで30〜60秒間固定後、上記の方法で二分割した。2.次いで液体窒素冷却イソペンタン・プロパン混合液中で急速凍結した。3.FD-3AS装置内(-95℃、2-6X10^<-7>Torr)でディープエッチングをかけた。4.白金と炭素を回転蒸着して、型のごとくレプリカ膜を作製した。5.モノクロナール抗体の作成:(1)ヒト赤血球膜より、スペクトリン蛋白を精製した。(2)その蛋白をBALB/Cマウスに免疫後に、脾臓を摘出し、リンパ球を採取した。(3)培養ミエローマ細胞と融合させてモノクロナール抗体を作成した。(4)作成されたモノクロナール抗体を電気泳動システムで反応させて、抗体の調整を行った。6.可溶性蛋白質を除去した赤血球膜細胞質側を、調整されたスペクトリン蛋白に対するモノクロナール抗体で免疫染色後にレプリカ膜を作製して、網目状の超微形態学局在を明らかにした。7.さらに赤芽球膜細胞質側の超微形態学的変化を同様の方法で検索し、スペクトリン蛋白以外の細線維構造を認め、発生学的検討を加えた。

On the cytoplasmic side of the erythrocyte membrane, a mesh-like structure is formed. The structure of the cell membrane lipid double layer is composed of three parts: the first part is composed of three parts: the second part is composed of three parts: the third part is composed of three parts: the fourth part is composed of four parts: the fourth part is composed of three parts: the fourth part is composed of four parts: the fourth part is composed of three parts: the fourth part is composed of four parts: the fourth part is composed of three parts: the fourth part is composed of four parts: the The high resolution of the cytoplasmic side of the membrane of the red bud was analyzed by rapid freezing method, and the antibody to the membrane protein was prepared by ultra-morphological analysis. 1. The soluble protein removal method in the red bud ball:(1) The red bud ball is divided into two parts by covering the two parts. (2)A portion of the sample is divided into two parts after 30 to 60 seconds of fixation. 2. The liquid is cooled and frozen rapidly in the mixture. 3.FD-3AS installed in the (-95℃,2 -6X10^<-7>Torr) 4. Platinum carbon vapor evaporation, type of film 5. Preparation of antibodies:(1) Purification of erythrocyte membrane proteins. (2)The BALB/C is the only one (3)Culture of cells and fusion of cells (4)To create a system for the regulation of antibodies in the electrokinetic system. 6. Soluble protein is removed from the cytoplasmic side of the erythrocyte membrane, adjusted to the protein, and the membrane is controlled by the antibody after immunostaining, and the mesh-like ultra-morphology is displayed. 7. The method of ultra-morphologic transformation of the cytoplasmic side of red bud membrane was studied. The micro-structure of red bud membrane other than protein was studied.