先天性オルニチントランスカルバミラーゼ欠損症の分子遺伝学的解析と胎内診断への応用

先天性鸟氨酸转氨甲酰酶缺乏症的分子遗传学分析及其在宫内诊断中的应用

• 批准号: 60227019
• 负责人: 児玉 浩子
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Special Project Research
• 财政年份: 1985
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1985 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-60227019/
• 关键词: 先天性オルニチントランスカルバミラーゼ欠損症; 無細胞合成系; サザンブロット; DNA診断

先天性オルニチン・トランスカルバミラーゼ(OTC)欠損症の分子遺伝学的検討を行った。方法1)2例の女児患児肝(OTC活性、C.R.M.低下例)で無細胞蛋白合成系によりRNAからOTC前駆体合成過程を検討した。又プロセシング操作によりOTC前駆体からOTC合成過程を調べた。2)DNA診断法の検討。正常人、患児白血球よりDNAを分離し、制限酵素(Msp【I】,Hind【III】,EcoR【I】, )で切断、電気泳動、サザンブロットを行ない、【^(32)P】およびビオチンラベルラットOTCcDNAとハイブリダイゼーションをして、ヒトOTC遺伝子のポリモルフィズムを調べた。結果および考察:図1に肝RNAからin vitroで合成されたOTC前駆体を示すが、P1では正常のOTC前駆体にうすいバンドのみ、P2では2本のバンド(1本は正常、1本は分子量3万)がみられた。この異常OTC前駆体はプロセシングをうけなかった(図2)。すなわち、OTC蛋白のない例の中にも、異なるタイプがあることを明らかにした。DNA診断に関しては、ビオチン標識の感度を検討した結果、【^(32)P】に比べ1/10以下の検出能しかなく、遺伝子診断には、現在のビオチン標識は使用できないと結論した。今回用いた制限酵素では、OTC遺伝子にポリモルフィズムは見られなかった。今後、種々の制限酵素、ヒトOTCcDNAを用いて、ポリモルフィズムの検出、DNA欠失例の検討を行なう予定である。

A study on the molecular genetics of congenital anaplastic syndrome (OTC). Method 1) Two cases of female patients with liver disease (cases with low OTC activity and C.R.M.) were analyzed using the cell-free protein synthesis system and the pre-OTC body synthesis process of RNA. And the operation of the プロセシングによりOTC before the body is made and the OTC synthesis process is adjusted. 2) Discussion of DNA diagnostic method. Normal and patient leukocytes were isolated from DNA and restriction enzymes (Msp【I】, Hind【III】, EcoR【I】, ) cutting, electrophoresis, サザンブロットを行ない, [^(32)P] およびビオチンラベルラットO TCcDNAとハイブリダイゼーションをして,ヒトOTC缝子のポリモルフィズムを Adjustmentべた. Result of investigation:図1にLiver RNAからin Synthetic test in vitro, OTC front body display, P1 normal OTC front body displayいバンドのみ, P2 では 2 本のバンド (1 は normal, 1 は molecular weight 30,000) がみられた.このAbnormal OTC former 駆体はプロセシングをうけなかった(図2).すなわち, OTC protein のない examples of の中にも, isoなるタイプがあることを明らかにした. DNA diagnosis test, the sensitivity of the test mark, the result, 【^(32)P】に比べ1/1 0 or less の検出能しかなく, 伝子DIagnosisには, and now のビオチンidentificationは use できないとCONCLUSION した. This time, I used いたlimited enzyme では and OTC 缝子にポリモルフィズムは见られなかった. From now on, the restriction enzymes, the use of OTC cDNA, the use of ポリモルフィズムの検, and the DNA missing cases are determined.

项目成果

J.Inher.Metab.Dis.9. (1986)

J.Inher.Metab.Dis.9。