血小板並びにTGF-β1によるエンドセリン-1産生促進作用とその病態生理学的意義

血小板和TGF-β1促进内皮素1生成及其病理生理意义

• 批准号: 06836017
• 负责人: 松村 靖夫
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Osaka University of Pharmaceutical Sciences
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 1995
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06836017/
• 关键词: エンドセリン-1; 血管内皮細胞; 血小板; TGF-β1

血小板を培養血管内皮細胞に添加すると、エンドセリン-1(ET-1)遺伝子発現増加に伴ってET-1遊離が促進された。同様の作用は、血小板懸濁液を加温後、血小板を除去した上清画分を用いた場合にも認められた。血小板中に豊富に存在することが知られているtransforming growth factor-β1(TGF-β1)を内皮細胞に添加した場合もET-1産生は用量依存的に増加した。これらTGF-β1及び血小板上清画分によるET-1産生促進作用は抗TGF-β1中和抗体により有意に抑制されたことから、血小板はTGF-β1の遊離を介して内皮細胞におけるET-1産生を促進的に調節している可能性が示唆された。血小板を含む多くの細胞から放出されるTGF-β1は大部分が生物学的に不活性な潜在型であり、生物活性の発現には、潜在型から活性型への活性化が必須である。そこで、血小板のET-1産生促進作用におけるTGF-β1の役割をより明確にするため、潜在型TGF-β1を活性化する方法として知られている酸処理及び熱処理を上清画分に施し、血小板の作用におよぼす影響について調べた。ADPにより凝集を惹起した血小板の上清画分に含まれるTGF-β1は、大部分が潜在型であり、酸処理または熱処理により上清画分中の活性型TGF-β1濃度は約10倍に増加し、同時に、内皮細胞からのET-1遊離促進作用も有意に増強された。また酸処理及び熱処理は内皮細胞におけるET-1遺伝子発現についても増強作用を示したことより、これら血小板作用の増強効果は活性型TGF-β1の増加によるものと考えられた。酸処理及び熱処理を施した上清画分に相当する濃度のTGF-β1を内皮細胞に添加した場合、ET-1産生促進作用は酸処理及び熱処理を施した上清画分の作用に比し明らかに弱いものであった。また、熱処理を施した上清画分に抗TGF-β1中和抗体を併用した場合、ET-1産生促進作用に対し有意な抑制はみられたが、その抑制は完全なものではなかった。以上血小板は、TGF-β1の遊離を介して内皮細胞におけるET-1産生を遺伝子レベルから促進的に調節している可能性が示唆された。また本作用は、単に血小板の凝集(活性化)のみに依存するものではないことも示された。さらに、血小板によるET-1産生促進作用は、活性型TGF-β1濃度と正の相関を示すが、本作用は活性型TGF-β1に加えて、TGF-β1と血小板から同時に放出される他の血小板由来因子との相互作用によっても修飾されている可能性が示唆された。

The increase of ET-1 gene expression in cultured platelet endothelial cells was accompanied by the increase of ET-1 free expression. In the same way, platelet suspension is heated, and platelets are removed. In the presence of abundant platelets, transforming growth factor-β1(TGF-β1) is known to increase in endothelial cells, and ET-1 production increases in dose-dependent manner. The possibility of promoting the production of ET-1 by TGF-β1 and platelet supernatant and intentionally inhibiting the production of ET-1 by anti-TGF-β1 neutralizing antibodies, and promoting the production of ET-1 by endothelial cells mediated by the release of TGF-β1 by platelets, was suggested. Platelet-containing cells release TGF-β1 most of which is biologically inactive, latent, biologically active, active, and necessary for activation. In this paper, the role of platelet ET-1 in promoting the activation of TGF-β1 is clearly defined, and the method of latent TGF-β1 activation is known. Acid treatment and heat treatment are used to regulate the effect of platelet ET-1 on supernatant. ADP induced platelet aggregation, and most of the supernatant contained latent TGF-β1. Acid treatment and heat treatment increased the concentration of active TGF-β1 in supernatant by about 10-fold, and the ET-1 free promotion effect of endothelial cells increased intentionally. Acid treatment and heat treatment enhance the expression of ET-1 gene in endothelial cells and enhance the activity of TGF-β1. When acid treatment and heat treatment are applied to supernatant, the concentration of TGF-β1 in endothelial cells is increased, and the effect of acid treatment and heat treatment on supernatant is weakened. When heat treatment is applied to the supernatant and anti-TGF-β1 neutralizing antibodies are used together, ET-1 produces a promotion effect, which is intentionally inhibited and completely inhibited. These findings suggest the possibility that platelets may mediate the release of TGF-β1 from endothelial cells and the regulation of ET-1 production in endothelial cells. This action is dependent on platelet aggregation (activation), which is also indicated in the following table. In addition, there is a positive correlation between the concentration of active TGF-β1 and the production of ET-1 in platelets. This effect may be mediated by the interaction between active TGF-β 1 and platelet production.