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市販鶏肉の表面で繰り広げられる細菌と原生動物の相互作用の可視化と応用

市售鸡肉表面细菌与原生动物相互作用的可视化及应用

基本信息

批准号：
15H05997
负责人：
大久保寅彦
金额：
$ 1万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2015
资助国家：
日本
起止时间：
2015-08-28 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15H05997/
关键词：
細菌叢食品衛生原生動物

项目摘要

1. 市販鶏肉上で生じている細菌と原生動物の相互作用を可視化するという当初計画に基づき、予備試験、鶏肉サンプルの採材、微生物叢解析、原生動物の分離培養を実施した。2. 鶏肉とアメーバまたはアメーバDNAを用いた予備試験により、鶏肉からの原生動物の検出限界は、培養法で1,000cell/g、遺伝子検出法（PCR）で0.1cell/gであると求められた。3. 市販鶏肉を購入し、(1)当日 (2)4℃ 2days (3)4℃ 7days (4)15℃ 2days (5)15℃ 7daysの条件で静置後にDNAを抽出し、微生物叢解析を行なった。16S rDNAに基づく細菌叢解析の結果、当日サンプルではガンマプロテオバクテリアやバシルスなどが多く、細菌叢に多様性がみられたのに対し、4℃静置サンプルではガンマプロテオバクテリアが圧倒的多数となっていた。属レベルで見た場合、こうしたガンマプロテオバクテリアの多くはエロモナス、シュードモナスなどの水系細菌・低温発育菌であったことから、こうした細菌は冷蔵した鶏肉の上で増殖し続けていたと考えられた。一方、15℃静置サンプルにおいては、2days時点ではガンマプロテオバクテリアが優占化したが、7days時点ではバクテロイデスの大幅な増加がみられた。これは好気性菌の増殖によって鶏肉表面の酸素が消費されたことによるものと考えられる。4. 当初、18S rDNAにもとづく原生生物叢の解析を実施予定であったが、ニワトリ由来DNAが障害となって解析を実施できなかった。分離培養では、2サンプルから2種類の鞭毛虫(Parabodo sp., Sandona sp.)を得た。これらの鞭毛虫と食中毒菌(E.coli, Salmonella Enteritidis)の共培養を実施したが、鞭毛虫は細菌数の増減に有意な影響を与えなかった。5. 鶏肉表面で生じている細菌叢構成の劇的な変化、および鶏肉に付着する鞭毛虫を検出した。今回は食中毒菌と相互作用する原生動物は得られなかったが、今後の調査により細菌の生存性や病原性に影響する微生物の検出につなげたい。

1. To visualize the interaction between bacteria and protozoa on commercially available meat, the original plan was based on basic research, preparation of test samples, material collection from meat suppliers, microflora analysis, and isolation and culture of protozoa. 2. The detection limit of protozoa was 1,000 cell/g by culture method and 0.1 cell/g by PCR method. 3. The DNA was extracted and the microbial flora was analyzed after standing at 4℃ for 2 days (3)4 ℃ for 7days (4)15℃ for 2 days (5)15℃ for 7days. The results of 16S rDNA gene base analysis of bacterial flora showed that most of the bacterial flora was under pressure when it was placed at 4℃. In this case, the bacteria in the water system and the bacteria in the low temperature culture are used to cultivate the bacteria in the upper part of the meat. 1. When the temperature is kept at 15℃, the temperature is increased by 2 days, and the temperature is increased by 7days. The growth of these bacteria is a major factor in the production of these proteins. 4. 18S rDNA analysis of protozoa is carried out to determine the origin of DNA damage. 2 species of flagellates (Parabodo sp., Sandona sp.) I got it. The co-culture of E.coli, Salmonella Enteritidis and the decrease of the number of bacteria in flagellates were studied. 5. The bacterial flora on the surface of the flesh constitutes a major change in the structure of the flesh, and the flagellates are present in the flesh. The protozoa are affected by the interaction of food poisoning bacteria, and future investigations are carried out to determine the survival and pathogenicity of bacteria.