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魚類特有の器官「ヒレ」を活用した細胞内寄生細菌に対する細胞性免疫機構の解明

利用鱼类特有的器官鳍阐明针对细胞内寄生细菌的细胞免疫机制

基本信息

批准号：
18H06022
负责人：
松浦雄太
金额：
$ 1.91万
依托单位：
Fisheries Research and Education Agency
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2018
资助国家：
日本
起止时间：
2018-08-24 至 2020-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、ブリ類において細胞性免疫を担う細胞を識別するための抗体を作製した。はじめに、ブリ白血球由来cDNAより細胞性免疫を担う細胞であるヘルパーT細胞およびキラーT細胞にそれぞれ特異的に発現するCD4およびCD8分子に対する遺伝子を単離した結果、CD4分子のホモログとしてCD4-1およびCD4-2、CD8分子のアイソフォームとしてCD8αおよびCD8βの計4遺伝子の単離に成功した。なお、本研究で単離した遺伝子は、これまでブリにおいて未報告の分子であった。次に、抗体作製に使用する免疫原を作製するため、CD4およびCD8分子を安定的に発現する細胞の作製を行った。単離した遺伝子をマウス由来細胞にそれぞれ一過的に強制発現させた結果、全ての遺伝子が膜タンパク質として翻訳されることを確認した。強制発現させた細胞は継代培養し、安定発現株の作製に用いた。このうち、安定細胞株の樹立に成功したのはCD4-1、CD4-2、CD8βの3分子であった。作製した安定細胞のうちCD4-1もしくはCD8β発現細胞をマウスに免疫し、定法に従い各分子に対するモノクローナル抗体の作製を行った。ブリ末梢血白血球を用いて抗体を産生するハイブリドーマの単クローン化を行った結果、生きたブリ白血球を認識する抗体の作製に成功した。現在、作製した抗体がCD4-1もしくはCD8βを正確に認識するかについて確認を行っている。

In this study, different types of cellular immunity were used to detect the level of antibody in this study. The origins of cDNA cells and white blood cells are cDNA. The cellular immunity is related to the cellular immune response. The cellular immune response is specific to the cellular immune response. The results show that the CD4 molecules are isolated, and the CD4-1 molecules are isolated. The CD8 molecule has been isolated successfully since it was isolated from CD8 α and CD8 β at the rate of 4%. In this study, we did not report any molecular data in this study. Secondary and antibody immunogens were used as antigens and CD4 immunogens were used as antigens and CD8 molecules were stable. The reason for this is that the system has been forced to realize the results, and the whole system has been used to make sure that the results are correct. It is necessary to use the existing plant of diazepam as a substitute for cell culture and diazepam. The cell lines of diazepam and diazepam were successfully isolated from CD4-1, CD4-2 and CD8 β-β. The cells were treated with diazepam (CD4-1) and CD8 β (CD8 β). The cells were immunized and the molecules were immunized. The results of peripheral white blood cells were analyzed by using antibody antibody, antibody antibody, antibody antibody and antibody. Now, make sure that the antibody CD4-1 is sensitive to CD8 β and that you are sure that you are doing so.