細胞質持続発現型RNAベクターを用いた高効率かつ安全な分化誘導方法の確立

建立高效、安全的细胞质持续表达RNA载体分化诱导方法

• 批准号: 23890026
• 负责人: 西村 健
• 金额: $ 2.08万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011-08-24 至 2013-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-23890026/
• 关键词: 持続発現型ベクター; 神経分化; 未分化細胞除去

マウスiPS細胞から神経細胞を分化させる系において、残存未分化細胞を除去するために、細胞質持続発現型RNAベクターを用いる系の構築を行った。まず、ブラストサイジン耐性遺伝子とP450遺伝子を同時に発現する細胞質持続発現型RNAベクターを用意し、それをマウスiPS細胞に感染させた。ベクター感染細胞を選択するためにブラストサイジンを培地に加えてpositive選択を行ったところ、ベクター非感染細胞の除去に成功した。また、ベクター感染によるマウスiPS細胞の生育阻害等は観察されなかった。このようにして用意した、すべての細胞にベクターが感染している細胞群に対して、次に、P450遺伝子の基質であるcyclophosphamideを培地に加え、negative選択の可否を検討した。その結果、数日ですべての細胞が死滅したことから、1つの細胞質持続発現型RNAベクターを用いて、positive-negative選択が可能であることを明らかにした。また、マウスiPS細胞を神経分化させる系の立ち上げも並行して行った。マウスiPS細胞から胚葉体を形成させ、ゼラチンコート上でレチノイン酸によって神経細胞への分化を誘導した。その結果、胚葉体形成から約2週間ほどすると、神経細胞様の細胞が観察されるようになったことから、このような系を用いて、マウスiPS細胞から神経細胞の誘導を行うことが出来ることを明らかにした。現在、上記のpositive-negative選択細胞質持続発現型RNAベクターを感染させたマウスiPS細胞を神経細胞に分化させた時の、分化能への影響、感染持続性への影響、未分化細胞除去の可否、等を検討している。

iPS cell differentiation, residual undifferentiated cells removal, cytoplasmic expression of RNA in the system construction P450 gene and cytoplasm-dependent RNA gene were simultaneously detected in iPS cells. Successful removal of infected cells and non-infected cells The infection of iPS cells and the reproductive inhibition of iPS cells were detected. This article discusses the possibility of cell population interaction, secondary interaction, and P450 gene matrix interaction with cyclophosphamide in culture. As a result, the number of cells in the cell is reduced, and the number of cells in the cytoplasm is reduced. In addition, iPS cells are differentiated into cells. The embryonic body of iPS cells is formed, and the differentiation of cells is induced. The results, embryonic body formation, and neuronal cells were observed in about 2 weeks. Now, the positive-negative selection of cytoplasmic-persistent RNA is discussed in the following aspects: the time of differentiation of iPS cells, the effect of differentiation ability, the effect of infection persistence, the possibility of removal of undifferentiated cells, etc.

项目成果

RNA工学とウイルス学の融合による簡便かつ高効率なiPS細胞樹立方法の確立

结合RNA工程和病毒学建立简单高效的iPS细胞构建方法

• 发表时间: 2011
• 作者: Arakaki M;Nakamura T;Fukumoto S;et.al;西村健
• 通讯作者: 西村健