センダイウイルスの持続感染機構の解析と遺伝子治療用ベクターへの応用

仙台病毒持续感染机制分析及其在基因治疗载体中的应用

• 批准号: 05J00168
• 负责人: 西村 健
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: National Institute of Advanced Industrial Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05J00168/
• 关键词: 遺伝子治療; センダイウイルス; ウイルスベクター; 持続感染; インターフェロン; cl.151株; 組換えウイルス

本研究では細胞傷害性が極めて低く、かつ長期にわたって細胞質内で安定な遺伝子発現を維持できるセンダイウイルス(SeV)Cl.151株の性質に着目し、その持続感染機構の解析を通して、遺伝性代謝疾患等の遺伝子治療において有用な、細胞質内で長期間安定に存在できるRNA遺伝子発現系の開発を試みている。昨年度、Cl.151株全長cDNAからM、F、HN各遺伝子を欠損させた組換えSeVの作製に成功したことを受け、今年度は、M、F、HNすべての遺伝子をブラストサイジン耐性遺伝子等の遺伝子と置き換えて欠損させた、非伝播性持続感染型SeVベクターの作製を試み、作製に成功した。次に、これらのベクターの持続感染性について検討した結果、ブラストサイジン添加の条件下では2ケ月以上感染が100%維持されており、ブラストサイジン非添加の条件下でも、ほぼ100%感染が維持された。以上の研究により、安全性、発現持続性を併せ持つ、非常に有用なツールである、非伝播性持続感染型SeVベクターの開発に成功した。また昨年度、SeV感染に対するインターフェロン誘導を抑制することが持続感染には重要であり、L遺伝子上に生じたCl.151株由来変異によってそのような抑制が起きているということを明らかにしたことを受け、L遺伝子変異SeVを用いて、SeV感染によるインターフェロン誘導メカニズムの解析を行った。その結果、L遺伝子変異SeV感染細胞では、ウイルス由来RNAのうち、ゲノム3'末端から転写され、リーダー配列からその下流までread throughしたRNAのコピー数が、特に感染初期において減少していたことから、これらのRNAがインターフェロン誘導因子として働いている可能性が示唆され、それらの発現量の減少によって細胞側のウイルス認識機構から逃れて持続感染していると考えられた。

In this study, we aimed to explore the development of a novel RNA gene expression system for the treatment of genetic disorders, such as low cytovirulence, long term stability, and maintenance of cytoplasmic stable gene expression. Last year, Cl.151 full-length cDNA fragments of M, F and HN were successfully cloned into SeV. This year, the cDNA fragments of M, F and HN were successfully cloned into SeV. In addition, under the condition of adding the virus, 100% infection was maintained for more than 2 months. The above research is successful in the development of safety, discovery and persistence, very useful, and non-invasive viruses. In the past year, SeV infection has been detected, and SeV induction has been suppressed. The infection has been detected and analyzed. Cl.151 strains have been isolated from different strains. As a result, the number of RNA in the infected cells was reduced in the early stage of infection, and the possibility of RNA induction factors was shown. The number of cells in which the virus is detected is reduced.

项目成果

Development of Novel Defective Sendai Virus Vectors Capable of Expressing Therapeutic Genes Persistently.

开发能够持续表达治疗基因的新型缺陷仙台病毒载体。

• 发表时间: 2007
• 作者: Ken Nishimura;et. al.
• 通讯作者: et. al.

Non-cytopathic Sendai Virus Strain Escapes from Type I Interferon Induction by Mutation in L protein.

非细胞病变仙台病毒株通过 L 蛋白突变逃避 I 型干扰素诱导。

• 发表时间: 2007
• 作者: Ken Nishimura;et. al.
• 通讯作者: et. al.

改良された持続感染型センダイウイルスベクター

改进的持久性仙台病毒载体

• 发表时间: 2007

センダイウイルス温度感受性株由来のウイルスベクター

仙台病毒温度敏感株衍生的病毒载体

• 发表时间: 2005

Persistent and stable gene expression by a cytoplasmic RNA replicon based on a noncytopathic variant Sendai virus

• DOI: 10.1074/jbc.m702028200
• 发表时间: 2007-09-14
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Nishimura, Ken;Segawa, Hiroaki;Nakanishi, Mahito
• 通讯作者: Nakanishi, Mahito