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B型肝炎ウイルスの生活環に必要な小胞輸送の分子スイッチの解明

阐明乙型肝炎病毒生命周期所需的囊泡运输分子开关

基本信息

批准号：
26893011
负责人：
井上淳
金额：
$ 0.92万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-08-29 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-26893011/
关键词：
HBV Rab

项目摘要

B型肝炎ウイルス（HBV）感染は肝硬変や肝癌の原因となり、世界的な問題の一つである。HBVは感染肝細胞において宿主細胞の機能を利用して自身の複製を行っているが、未だその詳細については不明な点が多い。特に、ウイルスが細胞内に侵入した後にどのように輸送されるか、あるいはウイルス複製過程においてその構成タンパクやゲノムがどのように輸送され、組み立てられて細胞外に放出されるかについてはほとんど明らかにされていない。本研究では細胞内輸送に必要な機構がどのようにHBVに利用されているか、小胞輸送の分子スイッチと考えられている低分子量GTPaseのRabタンパク質ファミリーに注目して明らかにすることを目的とした。まず、HBV粒子を恒常的に発現しているが放出されたHBVは再感染しないHepG2.2.15細胞を用いて、HBVの放出に関与するRabタンパク質を同定することとした。61種類のRabタンパク質ファミリーに対するsiRNAライブラリーを用いて、各Rabタンパク質を個別にノックダウンし、培養上清中に放出されたHBV DNAをreal-time PCRで、HBsAgをCLIA法にて定量した。その結果、Rabタンパク質によってHBV DNAを主に変化させるもの、HBs抗原を主に変化させるもの、両者を変化させるものに分けられた。HBV DNAは主にHBV粒子を、HBs抗原はゲノムやコアを含まないHBs抗原粒子 (SVP, subviral particle) の量を反映していると考えられており、HBV粒子とHBs抗原粒子を放出させる経路が異なっていることを示していると思われた。

Hepatitis B virus (HBV) infection is the cause of liver cirrhosis and liver cancer. HBV infects liver cells and utilizes host cell functions to replicate itself. In particular, it is necessary to organize the intracellular invasion and subsequent transportation of the cells. This study focuses on the mechanisms necessary for intracellular HBV transport and molecular transport. HBV reinfection in HepG2.2.15 cells is caused by the constant occurrence of HBV particles and the constant occurrence of HBV particles. 61 kinds of Rab DNA are released from culture supernatant, HBV DNA is quantified by real-time PCR and HBsAg is quantified by CLIA. The result is that the Rab virus is transmitted to the host cell, and the HBs antigen is transmitted to the host cell. HBV DNA mainly contains HBV particles and HBs antigen. The amount of HBs antigen particle (SVP) is reflected in the pathway of HBV particles and HBs antigen particle emission.