ヒト唾液腺癌細胞のoxa型ビタミンD誘導体による骨芽細胞への分化誘導に関する研究

氧代维生素D衍生物诱导人唾液腺癌细胞成骨细胞分化的研究

• 批准号: 06282242
• 负责人: 佐藤 光信
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06282242/
• 关键词: ヒト唾液腺癌細胞; oxa型ビタミンD誘導体; 骨芽細胞; アルカリフォスファターゼ; I型コラーゲン; オスチオポンチン; オステオネクチン; 破骨細胞

1.造腫瘍性ヒト唾液腺腺房細胞(HSG-AZA3)を、in vitroで22-oxa-1α,25-dihydroxyvitamin D_3[22-oxa-1α,25(OH)_2D_3](10^<-9>-10^<-11>M)と3mMβ-グリセロリン酸を含む増殖培養液で培養すると、骨芽細胞に分化誘導されることを明らかにした。すなわち、処理細胞において、骨芽細胞の特異的細胞マーカーであるアルカリフォスファターゼとI型コラーゲンの発現が、間接蛍光抗体法、Sigma kitを用いた染色法あるいはimmunoblottingにより検出された。また、von Kossa染色によりbone noduleの形成を認めた。さらに、処理細胞の足場依存性、足場非依存性増殖はともに有意に抑制された。なお、HSG-AZA3細胞の1α,25-dihydroxyvitamin D_3核内レセプターの発現は、このレセプターに対するマウス単クローン抗体を用いた間接蛍光抗体法により検出された。2.2x10^7個のHSG-AZA3細胞を6週齢Balb/cヌードマウスに移植した。形成された腫瘍に、10^<-9>M22-oxa-1α,25(OH)_2D_30.1mlを腫瘍内に連日30日間投与すると、腫瘍増殖は有意に抑制され、腫瘍内に骨組織の形成を認め、その周辺に存在する腫瘍細胞にヒトosteopontin(OPN)とヒトosteonectin(ON)mRNAの発現がin situ hybridizationにより検出された。この場合、ヒトOPNcDNA[336bpフラグメント(862-1197)]、ヒトONcDNA[526bpフラグメント(1446-1971)]をhybridizationプローブとして使用した。Digoxigenin-labeled single strand RNAプローブをDIG RNA Labeling Kit(Boehringrer)を用いて調製した。OPNとONmRNAとのhybridizationは50℃で16時間行い、シグナルはNucleic Acid Detection Kit(Boehringer)を用いて検出した。さらに、22-oxa-1α,25(OH)_2D_3により誘導された骨組織内および周囲に破骨細胞の特異的細胞マーカーである酒石酸耐性酸フォスファターゼ活性が検出された。以上の実験結果より、ヌードマウスで増殖しているHSG-AZA3細胞は22-oxa-1α,25(OH)_2D_3により骨芽細胞に分化誘導され骨を形成し、bone remodelingが生じて治癒することが示唆された。

1. Tumor-induced salivary gland cells (HSG-AZA3), in vitro 22-oxa-1α,25-dihydroxyvitamin D_3[22-oxa-1α,25(OH)_2D_3](10^<-9>-10^<-11>M)と3 The content of mMβ-グリセロリン acid is used for culturing and inducing the differentiation of bone bud cells.すなわち, processed cells において, bone bud cell specific cells マーカーであるアルカリフォスファターゼとI type コラーゲンの発成が, indirect photoantibody method, Sigma The kit uses the staining method and immunoblotting method.また、von Kossa dyeingによりbone noduleの成をcognitionめた. It is necessary to control the field-dependent and field-independent growth of cells and suppress them intentionally.なお, HSG-AZA3 cells 1α,25-dihydroxyvitamin D_3 core of the inner core The ス単クローンantibody method is based on the いた indirect photoantibody method. 2. 2x10^7 HSG-AZA3 cells were transplanted into Balb/c 6 weeks old. It can prevent the formation of tumors. 10^<-9>M22-oxa-1α,25(OH)_2D_30.1ml can be administered into tumors for 30 consecutive days. It can also inhibit the growth of tumors intentionally. Confirmation of the formation of bone tissue within the tumor and the presence of tumor cells around it, including the presence of osteopontin (OPN) and osteonectin (ON) mRNA in the tumor situ hybridizationにより検出された. In this case, ヒトOPNcDNA[336bpフラグメント(862-1197)], ヒトONcDNA[5 26bpフラグメント(1446-1971)]をhybridizationプローブとして用した. Digoxigenin-labeled single strand RNA was prepared using DIG RNA Labeling Kit (Boehringrer). OPN ONmRNA hybridization is carried out at 50℃ for 16 hours, and the Nucleic Acid Detection Kit (Boehringer) is used.さらに, 22-oxa-1α,25(OH)_2D_3 により induced されたbone tissue within the および week囲にOsteoclast's specific cells, マーカーであるtartaric acid-resistant acid フォスファターゼActivity, 検出された. The above results show that the differentiation of HSG-AZA3 cells using 22-oxa-1α,25(OH)_2D_3 osteoblasts and the formation of bone are induced by the proliferation of HSG-AZA3 cells. Remodeling is a healing process.