興奮性アミノ酸による神経細胞死とその防御機構に関する研究

兴奋性氨基酸引起的神经细胞死亡及其防御机制研究

• 批准号: 04258212
• 负责人: 田中 千賀子
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04258212/
• 关键词: 熱ショック蛋白質; NG108-15細胞; 細胞内カルシウム; イノシトール3リン酸; タプシガーギン; アンチセンスオリゴヌクレオチ

高熱、重金属や化学物質などのストレスに曝されると細胞内で熱ショック蛋白質(HSP)が誘導、合成され、細胞防御のために機能すると考えられている。脳虚血時にもHSPが発現し、その後に起こる神経細胞死に対する保護効果や回復機転への関与が報告されているが、その分子メカニズムについては未だ不明である。そこで神経芽細胞腫と神経膠細胞腫のハイブリッド細胞であるNG108-15細胞(NG細胞)を用いてHSPのイノシトールリン脂質代謝およびカルシウムシグナル系に対する作用を検討した。42.5℃、2時間の熱ショックを行った後、カルシウム蛍光指示薬のfura-2を取り込ませ、ブラジキニン(BK)あるいは細胞内CaATPase阻害薬のタプシガーギン(Th)により誘発される細胞内Ca^<2+>の上昇(Ca^<2+>rise)を測定した。熱ショック直後ではBKによるCa^<2+>riseは著明に抑制され、その後徐々に回復し、熱ショック後14時間でもとのレベルに戻った。72KD-HSP(HSP72)の発現レベルは熱ショック後約4時間で検出可能となり、14時間で最大となり、その後は減少した。一方、ThによるCa^<2+>riseは熱ショック後も変化しなかった。HSP発現を転写レベルで阻害するケルセチンあるいはHSP72に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いてHSP72の発現を抑制すると熱ショック後のCa^<2+>riseの回復はみられなかった。BKによる細胞内イノシトール3リン酸(IP3)産生は熱ショックにより影響をうけなかった。以上の結果より、熱ショックストレス時にはIP3レセプターの障害により細胞内Ca^<2+>の放出が抑制され、その回復過程にHSP72が機能していることが示唆された。

Heat, heavy metals, and chemicals may be used to induce, synthesize, and protect cellular proteins (HSP). HSP is present in the absence of blood, and the protective effects of neuronal death and recovery mechanisms are unknown. To investigate the role of HSP in lipid metabolism and lipid metabolism in human neuroblastoma and glioma cell line NG108-15 (NG). After heating at 42.5℃ for 2 hours, the intracellular Ca^<2+> rise induced by the intracellular CaATPase inhibitor fura-2 was measured. After the heat treatment, the Ca^<2+>rise was inhibited, and the recovery time was 14 days. 72KD-HSP(HSP72) appeared at about 4 hours after the onset of the disease, reached its maximum at about 14 hours, and then decreased. A square, Th Ca^<2+>rise is hot and cold. HSP72 can be inhibited by the occurrence of Ca ^<2+> rise after heat treatment, and the recovery of Ca^<2+>rise after heat treatment can be prevented. BK is the most important factor affecting the intracellular production of IP3. The above results indicate that HSP72 can inhibit the release of intracellular Ca^<2+> and inhibit the function of intracellular Ca^<2+> in the process of heat recovery.

项目成果

Y.Kajimoto: "cDNA cloning and tissue distribution of a rat ubipuitin carboxylterninal hydrolase PGP9.5." J.Biochem.112. 28-32 (1992)

Y.Kajimoto：“大鼠泛素羧基末端水解酶 PGP9.5 的 cDNA 克隆和组织分布。”

T.Hashimoto: "The loss of βII-protein kinase C in the striatum from patients with Huntington's disease." Brain Research.585. 303-306 (1992)

T.Hashimoto：“亨廷顿病患者纹状体中 βII 蛋白激酶 C 的缺失。”585-306 (1992)。

T.Kuno: "cDNA cloning of a neural visinin-like Ca2+-binding protein." Biochem.Biophys.Res.Commun.184. 1219-1225 (1992)

T.Kuno：“神经维西宁样 Ca2 结合蛋白的 cDNA 克隆。”

H.Shuntoh: "Molecular structure of the Cβ catalytic subunit of rat cAMP-dependent protein kinase and differential expression of Cα and Cβ isoforms in rat tissues and cultured cells." Biochim.Biophys. Acta.1131. 175-180 (1992)

H. Shuntoh：“大鼠 cAMP 依赖性蛋白激酶的 Cβ 催化亚基的分子结构以及大鼠组织和培养细胞中 Cα 和 Cβ 亚型的差异表达。Biochim.Biophys.175-180”。

T.Takaishi: "Evidence for distinct neuronal localization of γ and ε subunits of Ca(2+)/calmodulin-dependent protein kinase II in the rat brain." J.Neurochem.58. 1971-1974 (1992)

T.Takaishi：“大鼠大脑中 Ca(2+)/钙调蛋白依赖性蛋白激酶 II 的 γ 和 ε 亚基的不同神经元定位的证据。J.Neurochem.58 (1992)。