安定同位体を利用したNMRによるtRNAの立体構造解析法の開発

使用稳定同位素的NMR tRNA三维结构分析方法的开发

• 批准号: 05210203
• 负责人: 河合 剛太
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05210203/
• 关键词: RNA; NMR; 立体構造解析; 安定同位体標識; tRNA

[1]複合標識オリゴヌクレオチドによるRNAの核磁気共鳴の手法の開発 安定同位体標識されたリボソームRNAをリボヌクレアーゼT_1あるいはT_2をもちいて加水分解し、得られた消化物をカラムクロマトグラフィーによって分離精製することによって,4種のモノヌクレオチドおよび数種のジヌクレオチド,トリヌクレオチドを得た.これらの分子を用いて,各^<13>C,^<15>N核の化学シフト,および^1H-^<15>N,^1H-^<13>Cあるいは^<13>C-^<15>Nのスピン結合定数を決定した.また,これらの値に基づいて,異核種多次元(2次元,3次元)NMRの測定に成功している.[2]標識tRNAの立体構造解析 ^<15>N標識を行なった大腸菌のtRNA^<Ile>をもちいて,これを認識するイソロイシルtRNA合成酵素との相互作用を解析することに成功した.これらの複合体は分子量が14万を超える巨大なものであり,安定同位体標識NMR法がこのような系にも有効であることが明かになった.[3]RNA分子間の相互作用の解析 遺伝暗号の解読過程において,RNA分子間の相互作用--すなわちコドンとアンチコドンの対合--が極めて重要な役割を果たしている.この相互作用を解析するために,安定同位体標識NMR法を導入することを試みている.このため,tRNAのアンチコドンの前後の配列を化学合成によって作成した.一方,[1]で調製した[^<13>C,^<15>N]Upを原料として,[^<13>C,^<15>N]pUpを酵素的に調製した.現在,これらのユニットを連結し,アンチコドン1字目に標識ウリジン残基をもつアンチコドンアームを作成中である.一方,このアンチコドンに対応するコドン(4種類)も化学合成によって調製しており,これらとアンチコドンアームとの相互作用を解析する予定である.

[1] Composite identification リゴヌ リゴヌ レ レ チドによる チドによるRNA nuclear magnetic resonance nuclear technique nuclear development Stable isotopic body logo さ れ た リ ボ ソ ー ム RNA を リ ボ ヌ ク レ ア ー ゼ T_1 あ る い は T_2 を も ち い て hydrolytic decomposition し, ら れ た digest content を カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー に よ っ て separation of refined す る こ と に よ っ て, four の モ ノ ヌ ク レ オ チ ド お よ び several の ジ ヌ ク レ オ チ ド, ト リ ヌ ク レ オ チ ド を を た. こ れ ら の molecules with い て, each ^ < 13 > C, ^ < 15 > N nuclear の chemical シ フ ト, お よ び ^ - ^ 1 h < 15 > N, ^ - ^ 1 h < 13 > C あ る い は ^ < 13 > C - ^ < 15 > N の ス ピ ン combined with destiny を decided し た. ま た, こ れ ら の numerical に base づ い て, heteronuclear kind of multidimensional (two yuan, three yuan) N MR <s:1> determination: に successful. Youdaoplaceholder1 る る る.[2] analysis of the three-dimensional structure of tRNA <e:1> ^ < 15 > N line identification を な っ た coliform の tRNA ^ < Ile > を も ち い て, こ れ を know す る イ ソ ロ イ シ ル tRNA synthetic enzyme と の interaction を parsing す る こ と に successful し た. こ れ ら の complex は が molecular weight 140000 を え る huge な も の で あ り, stable isotopic body logo NMR method が こ の よ う な に Youdaoplaceholder0 has the effect of である とが とが and になった.[3]RNA intermolecular <s:1> interaction <e:1> analysis Heritage 伝 cipher 読 の solution process に お い て, の interaction between RNA molecules - す な わ ち コ ド ン と ア ン チ コ ド ン の us seaborne - が extremely め て important な "を cut fruit た し て い る. こ の interaction を parsing す る た め に, stable isotopic body logo NMR method を import す る こ と を try み て い る. こ の た め, tRNA の ア ン チ コ ド ン の The sequential sequence を is chemically synthesized into によって た. Side, [1] で modulation し た [^ < 13 > C, ^ < 15 > N] Up を materials と し て, [^ < 13 > C, ^ < 15 > N] pUp を enzyme に modulation し た. Now, こ れ ら の ユ ニ ッ ト を link し, ア ン チ コ ド ン 1 word に logo ウ リ ジ ン residues を も つ ア ン チ コ ド ン ア ー ム を made in で あ る. Side, こ の ア ン チ コ ド ン に 応 seaborne す る コ ド ン (4 kinds) も chemical synthesis に よ っ て modulation し て お り, こ れ ら と ア ン チ コ ド ン ア ー ム と の interaction を parsing す る designated で あ る.

项目成果

河合 剛太: "安定同位体標識NMR法によるRNAの立体構造解析" 生化学. 66. 60-64 (1994)

Kota Kawai：“通过稳定同位素标记 NMR 方法进行 RNA 的三级结构分析”《生物化学》66. 60-64 (1994)。

Tatsuya Niimi: "A ^<15>N-^1H nuclear magnetic resonance study on the interaction between isoleucine tRNA and isoleucyl-tRNA synthetase from Escherichia coli" Biochimie. (in press). (1993)

Tatsuya Niimi：“关于大肠杆菌异亮氨酸 tRNA 和异亮酰-tRNA 合成酶之间相互作用的 ^<15>N-^1H 核磁共振研究”Biochimie。