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血管における内皮依存性NO生成酵素誘導の機構

血管内皮依赖性NO生成酶诱导机制

基本信息

批准号：
05256229
负责人：
加藤隆一
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、血管を構成する細胞のうち内皮細胞および平滑筋細胞につき、誘導型NO生成酵素(iNOS)の発現条件を検討した。ラット大動脈内皮細胞および平滑筋細胞を継代培養した。内皮細胞では、ラットインターフェロン-gamma(IEN-gamma)、ヒト腫瘍壊死因子(TNF-alpha)、LPSの組み合わせで48時間まで刺激し、上清中の硝酸イオンおよび亜硝酸イオン(NOx)濃度をグリース法を用いて定量した。平滑筋細胞では、ヒト腫瘍壊死因子(TNF-alpha)、ヒトインターロイキン1alpha(IL-1alpha)あるいはIL-1beta、LPSで刺激した。細胞収集後、mRNAを抽出し、ラット肝iNOScDNAの700bp断片をプローブとしてノーザンブロットを行なった。細胞培養液、添加試薬は実験前にLPS濃度を測定した。全ての実験で実験系に混入したLPS濃度は20pg/ml未満であった。内皮細胞においては、IFN-gamma(100U/ml)、TNF-alpha(5000U/ml)、LPS(100ng/ml)の単独処置では、48時間までNOx産生を示さなかった。IFN-gammaおよびTNF-alpha同時処置で時間依存性にNOx産生及びiNOSmRNA増加がみられ、IFN-gammaとLPS、TNF-alphaとLPSの組み合わせもNOx、iNOSmRNAを増加させ、三者を同時に加えると相乗的に非常に強い強い誘導能を示した。平滑筋細胞においては、TNF-alpha、IL-1alpha、LPS単独処置では、48時間までNOx産生を示さなかった。IL-1beta単独処置でわずかにNOx産生がみられた。LPSおよびTNF-alpha、TNF-alphaおよびIL-1alpha、あるいはTNF-alphaおよびIL-1beta同時処置で時間依存性にNOx産生がみられた。内皮細胞とは異なり、サイトカインの組み合わせ(TNF-alphaおよびIL-1beta)で誘導されたNOx産生はLPSをさらに添加してもそれ以上の誘導は起きなかった。

In this study, we investigated the expression of inducible NO-producing enzyme (iNOS) in vascular endothelial cells and smooth muscle cells. Endothelial cells and smooth muscle cells were cultured in vitro. Endothelial cells were stimulated with nitric acid and nitric acid (NOx) concentrations in supernatant 48 hours after stimulation. Smooth muscle cells are stimulated by TNF-alpha, IL-1alpha and LPS. After cell assembly, mRNA was extracted and the 700bp fragment of iNOScDNA was extracted. LPS concentration was measured before cell culture medium and addition test. The total concentration of LPS was 20pg/ml. Endothelial cells were treated separately with IFN-gamma(100U/ml), TNF-alpha(5000U/ml), LPS(100ng/ml), and NOx production was shown at 48 hours. IFN-gamma and TNF-alpha simultaneous processing, time-dependent NOx production and iNOSmRNA increase, IFN-gamma and LPS, TNF-alpha and LPS combination, NOx and iNOSmRNA increase, and the three simultaneously increase. Smooth muscle cells are treated with TNF-alpha, IL-1alpha and LPS alone, and NOx production is indicated at 48 hours. IL-1beta alone is responsible for NOx production. TNF-alpha, IL-1alpha, TNF-alpha, IL-1beta, LPS, TNF-alpha, IL-1beta, TNF-1alpha, IL-1beta, IL-1beta, IL-1alpha, IL-1beta, IL-1alpha, IL-1beta, IL-1beta, IL- Endothelial cells are induced to produce NOx by the combination of TNF-alpha and IL-1beta.