Ca^<++>流入とカテコラミン分泌の急速脱感作の分子機構のリアルタイム同時測定による研究

实时同步测量研究Ca^++内流和儿茶酚胺分泌快速脱敏的分子机制

• 批准号: 01659513
• 负责人: 加藤 隆一
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 1990
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-01659513/
• 关键词: 脱感作; 細胞内カルシウム濃度; カテコラミン分泌; 副腎髄質

各種刺激による神経伝達物質などの遊離には脱感作が起こることが知られているが、その機構には不明な点が多く、脱感作の機構を明らかにすることは刺激-分泌関連、特にその調節機構の解明に重要なことと考えられている。本研究では、培養牛副腎髄質クロマフィン細胞を用い灌流系においてCA分泌の測定と同時に細胞内遊離カルシウム濃度変化を経時的に測定する新しい方法を用い、脱感作の分子機構を明らかにすることを目的としている。(1)実験方法の確立:牛副腎髄質クロマフィン細胞は単離して、differential platingによる精製の後、minimum essential mediumに10%牛胎仔血清を補った培養液にMEM non-essential amino acids(x100)をlml/100ml加えた培養液中で、マイクロビ-ズと混合し、5-7日目に実験に用いた。この方法により細胞の剥離が最小限に抑えられた。さらに、試作品であるが、分解洗浄可能でデッドスペ-スが約70μlのセルが完成した。(2)本灌流系での各種刺激薬物の効果:培養牛副腎髄質クロマフィン細胞において、高カリウムまたニコチンのパルス刺激により340nm励起の蛍光強度の上昇と380nm励起の蛍光強度の減少、又その比の上昇が見られ、その反応に伴い急速なカテコラミン分泌が認められた。パルス刺激の場合には両刺激ともに細胞内遊離カルシウム濃度とカテコラミン分泌の増減はパラレルであった。一方、持続刺激の場合、ニコチンが灌流液中に存在するにもかかわらず、細胞内遊離カルシウム濃度とカテコラミン分泌の上昇は急速な脱感作(t1/2=60sec)を受けることが明らかになった。また、興味あることに高カリウム刺激の場合細胞内遊離カルシウム濃度は高いレベルを維持するが、カテコラミン分泌には急速な脱感作が生じた。この結果はニコチン刺激と高カリウム刺激とでは脱感作現象が異なること、さらに高カリウム刺激の場合、細胞内遊離カルシウム濃度上昇以後の過程がカテコラミン分泌の脱感作に関与していることが示唆された。

Various stimulus に よ る god 経 伝 of material な ど の free に は off feeling as が up こ る こ と が know ら れ て い る が, そ の institutions に は unknown な が く more, feeling make の institutions を Ming ら か に す る こ と masato even は stimulus - secretion, に そ の regulator の interpret に important な こ と と exam え ら れ て い る. This study で は, cultivate adrenal marrow qualitative ク ロ マ フ ィ ン cells を using い perfusion system に お い て determination of CA secretion の と に cells at the same time free カ ル シ ウ ム concentration variations change を 経 に determination of す る new し を use い い method, feeling as の molecular institutions を Ming ら か に す る こ と を purpose と し て い る. (1) be 験 method の established: bovine adrenal mass marrow ク ロ マ フ ィ ン cells は 単 from し て, differential plating に よ る refined after の, minimum essential medium に 10% bovine fetal seed serum を fill っ に た cultures of MEM non - essential Amino acids (x100) を LML / 100 ml え た medium, で, マ イ ク ロ ビ - ズ と mixed し, 5-7 orders に be 験 に with い た. The によ <s:1> method によ cell <s:1> dissection が minimum limit に inhibition えられた. Youdaoplaceholder0, sample であるが, decomposition and washing may でデッドスペ-スが approximately 70μl of <s:1> セ が が が complete た. (2) the perfusion is で の various stimulus 薬 content の unseen fruit: cultivate cattle adrenal marrow qualitative ク ロ マ フ ィ ン cells に お い て, high カ リ ウ ム ま た ニ コ チ ン の パ ル ス stimulus に よ り 340 nm wound up の 蛍 light intensity の と 380 nm wound up の 蛍 light intensity の, less and そ の rise than の が see ら れ, そ の anti 応 に with い rapid な カ テ コ ラ ミ ン points Secrete が recognize められた. パ ル ス stimulus の occasions に は struck stimulus と も に intracellular free カ ル シ ウ ム concentration と カ テ コ ラ ミ exudation の raised ン は パ ラ レ ル で あ っ た. Side, holding 続 stimulate の occasions, ニ コ チ ン が に exist in perfusion liquid す る に も か か わ ら ず, intracellular free カ ル シ ウ ム concentration と カ テ コ ラ ミ ン secretes の rise は な feeling off sharply (t1/2 = 60 SEC) を by け る こ と が Ming ら か に な っ た. ま た, tumblers あ る こ と に high カ リ ウ ム stimulate intracellular free カ の occasions ル シ ウ ム high concentration は い レ ベ ル を maintain す る が, カ テ コ ラ ミ ン secretion に は な feeling off rapidly grown as が じ た. こ の results は ニ コ チ ン stimulate high と カ リ ウ ム stimulus と で は sense as a phenomenon が off different な る こ と, さ ら に high カ リ ウ ム stimulation の occasions, intracellular free カ ル シ ウ ム levels rise after の process が カ テ コ ラ ミ ン secretes の off feeling に masato and し て い る こ と が in stopping さ れ た.

项目成果

Sasakawa,N.: "Stimulation by ATP of inositol trisphosphate accumulation and calcium mobilization in cultured adrenal chromaffin cells." J.Neurochem.52. 441-447 (1989)

Sasakawa,N.：“ATP 刺激培养的肾上腺嗜铬细胞中肌醇三磷酸的积累和钙动员。”

Sasakawa,N.: "Calcium uptake-dependent and-independent mechanisms of inositol trisphosphate formation in adrenal chromaffin cells:comparative studies with high K^+,carbamylcholine and angiotensin II." Cell.Signal.1. 75-84 (1989)

Sasakawa，N.：“肾上腺嗜铬细胞中肌醇三磷酸形成的钙吸收依赖性和独立机制：高 K^、氨甲酰胆碱和血管紧张素 II 的比较研究。”

Sasakawa,N.: "Neurotransmitter receptor:neuroreceptor mechanisms in brain" Plenum Press,

Sasakawa，N.：“神经递质受体：大脑中的神经受体机制”Plenum Press，

加藤 隆一: "ホスホリパ-ゼC活性化によるイノシト-ルリン酸動態" 細胞工学. 8. 1069-1076 (1989)

Ryuichi Kato：“磷脂酶 C 激活诱导的肌醇磷酸动力学”细胞工程 8. 1069-1076 (1989)。

加藤隆一: "刺激-分泌関連におけるシグナルトランスダクションとCa動態" 日本薬理学雑誌. 93. 271-281 (1989)

Ryuichi Kato：“刺激-分泌关系中的信号转导和 Ca 动力学”日本药理学杂志 93. 271-281 (1989)。