Hsc70の核タンパク質輸送における役割の解析

Hsc70在核蛋白转运中的作用分析

• 批准号: 05268223
• 负责人: 今本 尚子
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05268223/
• 关键词: 70kDa熱ショックタンパク質; 核タンパク質輸送

本研究はこれまでに同定した、核タンパク質輸送を担う細胞質因子の一つであるhsc70と相互作用する、輸送を担う他の因子の同定とその機能解析を通し、核タンパク質輸送におけるhsc70の役割を明かにすることを目的とする。輸送を担う因子の同定は、digitonin処理で作製したsemi-intact cellを用いたin vitro核タンパク質輸送実験系を導入し、輸送に必要な粗細胞質抽出液を分画し、輸送活性を追跡することにより行なった。粗細胞質抽出液をイオン交換クロマトグラフィーで分画した結果、輸送活性を相補する、低塩濃度で溶出される分画Iと、高塩濃度で溶出される分画IIを得た。輸送活性には両方の分画が必要であり、両方の分画にはhsc70以外の、輸送に必要な因子が含まれていることも判明した。semi-intact cellを核タンパク質と分画II存在下で反応させると、系に加えた核タンパク質はATP非存在下、4℃の条件で核膜表面に結合するが、更に核内に核タンパク質を集積させるためには、分画Iを加え、ATP存在下、30℃でインキュベーションする必要があった。このことから、分画IIは核タンパク質の核膜孔への結合のステップを担い、分画Iは、それに続く核膜孔通過反応を担うことが判った。hsc70が分画IIに依存した核タンパク質の核膜孔へのターゲッテイングのステップを促進したため、分画IIに注目し、この分画に含まれる因子の解析を進めた。分画IIと核タンパク質を反応させると約500kDaの安定なcomplexを形成し単離したこのcomplexそのものが核膜孔へのターゲッテイング活性をもつことがわかった。単離したcomplexは、輸送される核タンパク質と4つの細胞質因子から形成されていることが確認された。核タンパク質が、核膜孔へターゲッテイングするために、細胞質で単離可能な安定なcomplexを形成することが初めて確認されたのと同時に、その構成成分が同定できた研究成果は大きい。今後、単離したcomplexの各構成蛋白を精製し、その構造を決定する。更に、ターゲッテイングcomplexが結合する核膜孔構成タンパク質を同定する。complexの再構成実験及びcomplexと核膜孔との結合反応の解析を通して、これらの反応過程におけるhsc70の役割を明かにする。

The purpose of this study is to clarify the function of hsc70 in the interaction between cytoplasmic factors involved in nuclear transport and other factors involved in nuclear transport. The transport factor is regulated by digitonin treatment, and the semi-intact cell is used in vitro nuclear transport system. The crude cytoplasmic extract necessary for transport is analyzed and the transport activity is tracked. Crude cytoplasmic extracts were analyzed for results of exchange, transport activity, dissolution at low concentrations, and dissolution at high concentrations. The transport activity is determined by the necessary factors other than hsc 70. Semi-tact cell nuclear mass in the presence of ATP, 4 ℃ conditions, nuclear membrane surface binding, more nuclear mass accumulation, semi-tact cell nuclear mass in the presence of ATP, 30 ℃ conditions, 30 ℃ conditions. The nuclear membrane pores of the nucleus are separated into two parts, namely, the nuclear membrane pores of the nucleus are separated into two parts, and the nuclear membrane pores of the nucleus are separated into two parts. hsc 70 is a component II dependent on the quality of the nuclear membrane and the analysis of the factors involved in the component II. Phase II: The formation of a stable complex of about 500 kDa in the form of a nuclear membrane pore Single cell complex, transport, and cytoplasmic factor formation The results of this research are significant for the formation of nuclear and cytoplasmic complexes, and for the identification of their constituent components. In the future, the structure of each component protein of the complex will be determined. In addition, the composition of nuclear membrane pores is determined by the same quality. The recombination of complex and the analysis of nuclear membrane pore and binding reaction are discussed in detail.

项目成果

Okuno Yumiko: "70-kDa heat shock cognate protein colocalizes with karyophilic proteins into the nucleus during their transport in vitro." Experimental Cell Research. 206. 134-142 (1993)

Okuno Yumiko：“70 kDa 热休克同源蛋白在体外运输过程中与亲核蛋白共定位到细胞核中。”