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核膜サブドメインを形成する分子基盤と形成機構の解析

核膜亚结构域分子基础及形成机制分析

基本信息

批准号：
19038027
负责人：
今本尚子
金额：
$ 5.31万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

真核生物が進化の過程で獲得した核膜は、遺伝子を封入して遺伝子機能を担う因子群を濃縮するだけでなく、高次クロマチン構築の足場として遺伝子機能を支える細胞内構造である。核膜とクロマチンの物理的・機能的繋がりを探るため、核膜に存在する最も顕著な構造体である核膜孔複合体に注目し、その挙動を調べた。その結果、核膜孔複合体の分布が細胞分裂終期に核膜が形成されるときに定まること、また、その分布がG1初期の細胞運命が決定される時期に崩れること、更に、核膜孔複合体の分布にlaminなどの核内膜因子が積極的に寄与することを明らかにしてきた。細胞機能に即して規則的に変化する核膜上のこの領域を核膜サブドメインと名付けた。膜貫通型の核膜孔複合体因子や異なるサブドメインに局在する核内膜因子の各々に、異なる蛍光タンパク質を付加して同時に2種タンパク質を安定に発現する細胞株を取得し、ライブ観察を行った。その結果、核膜形成初期に核内膜や核膜孔複合体などの因子群が染色体側部にまず集積し、その後、染色体上を局在化することでサブドメインが形成されることを確認した。この過程を生化学的に解析するため、取得した安定発現株の、分裂期のセミインタクト細胞を作成した。そのセミインタクト細胞に細胞抽出液とATPを添加すると、添加した因子に依存して、膜貫通型の核膜因子が染色体側部にターゲットし、更に、染色体上を局在化することがわかった。生細胞で見られる核膜形成初期反応を、in vitroで再構築できたことを示す結果である。蛍光チューブリンを加えると、この再構成では、紡錘体形成も再現され、核膜因子の局在化に関与することを示唆する結果を得ている。この系を利用することにより、核膜形成を担う可溶性因子や核膜因子の局在化機構、並びに、核膜因子を集積させる染色体側要素の、生化学的解析が可能になる。当初の研究目的を十分に達成したと考える。

The process of eukaryote evolution leads to the formation of nuclear membranes, the encapsulation of spores into eukaryotes, the ability to support the factor group, and the ability to support the production of intracellular drugs in the field of eukaryotes. The nuclear membrane plays an important role in the mechanism of physics, and the existence of the nuclear membrane plays an important role in the structural structure of the complex of nuclear membrane holes. Results, nuclear pore complex distribution, nuclear membrane formation, cell division, cell cycle, cell cycle, The cell phone can be used to modify the rules. In the field of the nuclear membrane, there is a real name payment on the nuclear membrane. The cell line was obtained and the cell line was detected by two kinds of diazepam assay at the same time in the cell line of the cell line. The results showed that in the early stage of nuclear membrane formation, the nuclear intima, the nuclear pore complex factor group, the part of the chromosome and the chromosome were detected in the early stage of nuclear membrane formation. after the formation of the nuclear membrane, the chromosome was localized. In the course of the process, the biochemical analysis was carried out, the diazepam was obtained, and the cells were made during the division period. The cell extractive fluid ATP was added, the factor was dependent, the membrane was common, the chromosome was localized, the chromosome was localized. In the early stage of the formation of nuclear membrane, cell cycle was detected and in vitro was used to detect the results. The results show that there are significant differences in the formation of the body, and the results of the nuclear membrane factor. Nuclear membrane formation plays an important role in the formation of soluble factors, nuclear membrane factors and biochemical analysis. At the beginning, the purpose of the study was very successful.