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核蛋白質を核膜孔へターゲットする蛋白質複合体の同定及びその構成因子の機能解析

将核蛋白靶向核孔的蛋白质复合物的鉴定及其组成因素的功能分析

基本信息

批准号：
07680768
负责人：
今本尚子
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07680768/
关键词：
核タンパク質輸送核局在化シグナル核膜孔 In vitro輸送系

项目摘要

核蛋白質の核内への移行は、核局在化シグナルに依存した細胞質から核膜孔までの第一のステップと、エネルギーを利用して核膜孔を通過する第二のステップに大きく分けられる。本研究者は、in vivo培養細胞実験系とセミインタクト細胞を用いたin vitro実験系を駆使して、第一のステップに働く細胞質因子の解析を進めた。in vitro実験系を用いた解析より、核蛋白質は細胞質抽出液中で、安定な蛋白質複合体を形成し、この複合体自身が他の因子を必要とせずに核膜孔へ結合する活性をもつことを見い出した。この複合体を、その活性に基づいて「核膜孔ターゲティング複合体」と名付けた。この複合体を構成する因子を精製し、その中の58kDaと97kDaの因子が活性に必須であることを明らかにした。この2因子の部分アミノ酸配列を決定し、遺伝子クローニングに成功した。これらのrecombinant蛋白質を用いた解析から、58kDa因子は、核局在化シグナルを認識し、核蛋白質とともに核内に移行することが明らかとなった。一方、97kDa因子は、核局在化シグナルとは結合せず、58kDa因子に結合することによって3者の複合体を核膜孔にまでターゲットする活性を有することがわかった。更に、58kDa因子に対するアフィニティー精製抗体を、生きた培養細胞の細胞質に微小注入すると、同時に注入したSV40T抗原の核局在化シグナルをもつ核蛋白質の核内移行が阻害され、この因子が生きた細胞内で確かに核蛋白質輸送を担うことが証明された。本研究により、核蛋白質輸送の基本的pathwayの分子機構の全容を明らかにする上で重要な足がかりを築くことができ、当初の研究目的は十分に達成できたと考えられる。

The nucleoprotein is located in the nucleus, and the nuclear bureau is in the process of making use of the nuclear membrane pore, the first nuclear membrane pore and the second nuclear membrane pore. In this study, in vivo cell culture system was used to analyze the cell factor analysis by using the in vitro system to analyze the cell factor. In vitro DNA was extracted from the extract of nucleoprotein, diazepam, diazepam, complex, and the complex itself. It was necessary to combine the nuclear membrane pore with bioactivity assay. The complex, the active gene, the nuclear membrane pore, the active gene, the active gene, the nuclear membrane pore, the active gene, the nuclear membrane pore, the The 58kDa 97kDa in the complex must be changed into a factor that is active. In the "Factor 2" section, the acid column is determined, and the sub-column is called success. The expression of recombinant protein was analyzed by molecular analysis, 58kDa factor, nuclear administration, nucleoprotein, nucleoprotein, nuclear protein, nuclear factor, nuclear factor, nuclear protein, nucleoprotein, protein, protein One side, the 97kDa factor, the nuclear bureau, the combination of the chemical factor and the 58kDa factor, the nuclear membrane pore, the nuclear factor, the nuclear factor. 58kDa factor was used to detect sperm antibody, cell culture, cell culture, microinjection and simultaneous injection of SV40T antigen into the nuclei of the nucleosides of the nucleosides, and the cytokines were confirmed that the nucleoprotein was transferred into the nuclei of the cells. In this study, the basic molecular mechanism of pathway is widely used in this study. In this study, the basic molecular mechanism of nucleoprotein transfer is widely used to show that it is very important for the purpose of the study.