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分裂間期核の核膜孔複合体形成におけるメンブレントラフィックの役割の解析

膜交通在间期核核孔复合体形成中的作用分析

基本信息

批准号：
18050037
负责人：
今本尚子
金额：
$ 4.22万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18050037/
关键词：
核膜孔複合体イメージング Photobleach 細胞周期膜貫通型タンパク質走査電子顕微鏡形成前駆体構造核膜孔複合体構成因子核膜超分子構造体形成生細胞イメージング脂質2重膜メンブレントラフィック Photo-bleaching

项目摘要

核膜孔複合体は、数個のサブコンプレックスから形成されることが近年明らかになっている。このため、各サブコンプレックスに含まれる代表的な蛋白質に蛍光タグを付け、HeLa細胞内で発現させて安定発現株を作製した。これらの安定発現株では核膜孔がラベルされ、そのダイナミクスをライブ観察することが可能となった。とりわけ、複合体の中で最も安定に存在するNUP133-YFPの発現株では、488nmレーザーをもちいて核膜表面のある核膜孔領域をbleachすることができ、新たに形成された核膜孔を可視化できるようになった。この手法と細胞周期の阻害剤を組み合わせることによって、間期の核膜孔形成が、細胞周期によって厳密にコントロールされていることが示された。また、走査電顕観察では、増殖期細胞において、核膜孔の形成過程らしき前駆体構造を捉えることに成功した。このような前駆体は脳のプリキンエ細胞など、分化細胞では観察されなかった(以上投稿準備中)。また、膜貫通型の核膜孔複合体構成因子であるPom121のヒト遺伝子座を詳細に解析した結果、ヒトには2つの全長Pom121がコードされていること、その2つの遺伝子からmRNAが共に読まれて、両者から、わずかにアミノ酸配列の異なるタンパク質が同じHeLa細胞内で発現していることを質量分析で確認した。この2つのPom121に蛍光をタグをつけた安定発現株を得て、発現タンパク質を指標に、それぞれの遺伝子に特異的に作用する複数のRNAオリゴを作用させた。その結果、2つのPom121を効率よくノックダウンしたときにのみ、核膜孔全体が消失することを確認した。このことは、Pom121が核膜孔複合体形成に必須の役割を果たすことを示している。この結果は、これまでに報告されていたPom121の、複合体構築における相反する機能に対して、1つの決着をつけたものとなった。

The nuclear membrane pore complex is formed by several nuclear membrane pores. In recent years, it has become a nuclear membrane pore complex.このため, each サブコンプレックスにcontains なprotein に蛍光 represented by まれるIt is produced by HeLa and HeLa cells.これらの stabilization is now a strain of では nuclear membrane pore がラベルされ, そのダイナミクスをライブ観看することがpossible となった.とりわけ, the most stable one in the complex exists するNUP133-YFP の発成では, 488nm レーザーをもちいてNuclear membrane surface のあるnuclear membrane pore area をbleach することができ, new たに formation されたnuclear membrane pore をvisualization できるようになった.この Technique, Cell Cycle Inhibitor Group み合わせることによって, Interphase Nuclear Membrane Pore Formation, cell cycle and cell cycle. The results of the walk-through inspection of the cells, the formation process of the proliferative phase cells, and the formation of nuclear membrane pores were also successful.このような前槆体は脳のプリキンエ Cell など, Differentiated Cell では観看されなかった (the above submission is in preparation).また、Membrane penetration type nuclear membrane pore complex constituting factor であるPom121のヒト伝子台をDetailsにanalytic した results, ヒトには2つのfull length Pom121がコードされていること, その2つの伝子からmRNAが公に読まれて、両者から、わずかにアミノ的 acid coordination sequence The quality of the nanoparticles is the same as that found in HeLa cells, and the results are confirmed by quality analysis.この2つのPom121に蛍光をタグをつけた stabilizing 発appears the strain を德て, 発appears the タンパク性をIndicatorに,それぞれの伝子にspecificにeffectするpluralのRNAオリゴをactionさせた.その results, 2つのPom121をefficiencyよくノックダウンしたときにのみ, all nuclear membrane pores disappearedすることをconfirmationした.このことは、Pom121がnuclear membrane pore complex formation is necessary for the formation of the nuclear membrane pore complex.このRESULTは、これまでにreportされていたPom121の、Complex Construction The opposite function of におけるするに対して, 1つのdetermination をつけたものとなった.

项目成果

期刊论文数量（15）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Ion irradiation in liquid of μm3 region for cell surgery

DOI：
10.1063/1.2834695
发表时间：
2008-01
期刊：
Applied Physics Letters
影响因子：
4
作者：
Y. Iwai;T. Ikeda;T. Kojima;Y. Yamazaki;K. Maeshima;N. Imamoto;Tomohiro Kobayashi;T. Nebiki;T. Narusawa;G. Pokhil
通讯作者：
Y. Iwai;T. Ikeda;T. Kojima;Y. Yamazaki;K. Maeshima;N. Imamoto;Tomohiro Kobayashi;T. Nebiki;T. Narusawa;G. Pokhil

Cohesin is required for the transcriptional insulator function of CTCF binding sites.

CTCF 结合位点的转录绝缘子功能需要粘连蛋白。

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
Nature (Article) 451
影响因子：
0
作者：
Wendt;K.S.;Yoshida;K.;Itoh;T.;Bando;M.;Koch;B.;Schirghuber;E.;Tsutsumi;S.;Nagae;G.;Ishihara;Ko.;Mishiro;T.;Yahata;K.;Imamoto;F.;Aburatani;H.;Nakao;M.;Imamoto;N.;Maeshima;K.;Shirahige;K.;and Peters;J.-M.
通讯作者：
J.-M.

Two distinct human POM121 genes: Requirement for the formation of nuclear pore complexes