分裂間期核の核膜孔複合体形成におけるメンブレントラフィックの役割の解析

膜交通在间期核核孔复合体形成中的作用分析

• 批准号: 18050037
• 负责人: 今本 尚子
• 金额: $ 4.22万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18050037/
• 关键词: 核膜孔複合体; イメージング; Photobleach; 細胞周期; 膜貫通型タンパク質; 走査電子顕微鏡; 形成前駆体構造; 核膜孔複合体構成因子; 核膜; 超分子構造体形成; 生細胞イメージング; 脂質2重膜; メンブレントラフィック; Photo-bleaching

核膜孔複合体は、数個のサブコンプレックスから形成されることが近年明らかになっている。このため、各サブコンプレックスに含まれる代表的な蛋白質に蛍光タグを付け、HeLa細胞内で発現させて安定発現株を作製した。これらの安定発現株では核膜孔がラベルされ、そのダイナミクスをライブ観察することが可能となった。とりわけ、複合体の中で最も安定に存在するNUP133-YFPの発現株では、488nmレーザーをもちいて核膜表面のある核膜孔領域をbleachすることができ、新たに形成された核膜孔を可視化できるようになった。この手法と細胞周期の阻害剤を組み合わせることによって、間期の核膜孔形成が、細胞周期によって厳密にコントロールされていることが示された。また、走査電顕観察では、増殖期細胞において、核膜孔の形成過程らしき前駆体構造を捉えることに成功した。このような前駆体は脳のプリキンエ細胞など、分化細胞では観察されなかった(以上投稿準備中)。また、膜貫通型の核膜孔複合体構成因子であるPom121のヒト遺伝子座を詳細に解析した結果、ヒトには2つの全長Pom121がコードされていること、その2つの遺伝子からmRNAが共に読まれて、両者から、わずかにアミノ酸配列の異なるタンパク質が同じHeLa細胞内で発現していることを質量分析で確認した。この2つのPom121に蛍光をタグをつけた安定発現株を得て、発現タンパク質を指標に、それぞれの遺伝子に特異的に作用する複数のRNAオリゴを作用させた。その結果、2つのPom121を効率よくノックダウンしたときにのみ、核膜孔全体が消失することを確認した。このことは、Pom121が核膜孔複合体形成に必須の役割を果たすことを示している。この結果は、これまでに報告されていたPom121の、複合体構築における相反する機能に対して、1つの決着をつけたものとなった。

The nuclear pore complex is formed in several places in recent years. The expression of protein in HeLa cells is stable and stable. The stability of the plant is due to the presence of nuclear pores. NUP133-YFP is the most stable species in the complex. It is found at 488nm in the surface of the nuclear membrane. The cell cycle is regulated by the regulation of cell cycle inhibition, nuclear pore formation and cell cycle regulation. We have successfully investigated the formation of nuclear pores in cells at the developmental stage and the structure of precursors. The precursor cells and differentiated cells are under investigation (the above submission is in preparation). Detailed analysis of the membrane penetrating nuclear pore complex component factor Pom 121 gene locus confirmed the presence of 2 full-length Pom121 genes in HeLa cells by mass analysis. These 2 Pom121 light sources are stable, and they can be used to detect the presence of a variety of RNA molecules. The results of this study were as follows: 2. Pom121 efficiency was confirmed. The formation of nuclear pore complexes in the Pom121 and Pom121 regions is necessary for the formation of nuclear pore complexes. The results are reported in Pom121 and complex construction in reverse function.

项目成果

Ion irradiation in liquid of μm3 region for cell surgery

• DOI: 10.1063/1.2834695
• 发表时间: 2008-01
• 期刊: Applied Physics Letters
• 影响因子: 4
• 作者: Y. Iwai;T. Ikeda;T. Kojima;Y. Yamazaki;K. Maeshima;N. Imamoto;Tomohiro Kobayashi;T. Nebiki;T. Narusawa;G. Pokhil

Cohesin is required for the transcriptional insulator function of CTCF binding sites.

CTCF 结合位点的转录绝缘子功能需要粘连蛋白。

• 发表时间: 2008
• 期刊: Nature (Article) 451
• 作者: Wendt;K.S.;Yoshida;K.;Itoh;T.;Bando;M.;Koch;B.;Schirghuber;E.;Tsutsumi;S.;Nagae;G.;Ishihara;Ko.;Mishiro;T.;Yahata;K.;Imamoto;F.;Aburatani;H.;Nakao;M.;Imamoto;N.;Maeshima;K.;Shirahige;K.;and Peters;J.-M.
• 通讯作者: J.-M.

Two distinct human POM121 genes: Requirement for the formation of nuclear pore complexes

• DOI: 10.1016/j.febslet.2007.09.021
• 发表时间: 2007-10-16
• 期刊: FEBS LETTERS
• 影响因子: 3.5
• 作者: Funakoshi, Tomoko;Maeshima, Kazuhiro;Imamoto, Naoko
• 通讯作者: Imamoto, Naoko

cHS4 insulator-mediated alleviation of promoter interference during cell based expression of tandemly associated transgense.

在串联相关转基因的细胞表达过程中，cHS4 绝缘子介导的启动子干扰减轻。

• 发表时间: 2007
• 期刊: J. Mol. Biol. 374(3)
• 作者: Yahata;K;et. al.
• 通讯作者: et. al.

Structural basis for substrate recognition and dissociation by human transportin 1

• DOI: 10.1016/j.molcel.2007.08.006
• 发表时间: 2007-10-12
• 期刊: MOLECULAR CELL
• 影响因子: 16
• 作者: Imasaki, Tsuyoshi;Shimizu, Toshiyuki;Sato, Mamoru
• 通讯作者: Sato, Mamoru