MHCクラスII分子変異細胞株を用いた自己抗原処理・提供機構の解析

利用MHC II类分子突变细胞系分析自身抗原加工和传递机制

• 批准号: 05272220
• 负责人: 木本 雅夫
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: 佐賀医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05272220/
• 关键词: MHCクラスII分子変異細胞株; 自己抗原処理・提示; クローン化T細胞; BW; F1マウス; 自己免疫疾患; 自己抗原ペプチド

抗原提供細胞(APC)変異株の機能的スクリーニング法を確立し,種々の変異株の機能的・構造的解析を行なった.APC株は我々が以前作成したB/WF1マウス自己免疫疾患発症に関与すると推定されているAbetaz/Aalphadハプロタイプ混合クラスII分子のみを発現するトランスフェクタント細胞を用い,それに拘束されるB/WF1マウス由来の自己反応性および外来抗原反応性T細胞クローンにより解析を行なった.(1)クローン化T細胞との反応性の消失を指標としてAPC変異株作成の条件を検討した.当初,T細胞クローンと野生型APC凝集塊を磁気ビーズを用いて分離する方法を検討したが,その後の研究で,凝集塊を作成した野生型APCは増殖が抑制され死滅することがわかった.従って,自己反応性T細胞クローンと変異誘導剤(EMS)で処理されたAPC株を混合培養し,生き残った変異APC株をクローニングすることにより,効率良く変異株を作成できることがわかった.(2)クラスI分子発現欠損株や接着分子発現欠損株以外に,以下のような特性を有する変異株が得られた.(2a)外来抗原(KLH)の処理提示機構に異常を伴わないが,自己抗原反応性T細胞クローンに対する刺激能力を消失した変異株.この変異株のクラスII分子のペプチド結合部位に1-2箇所のアミノ酸変異があることがDNAシークエンスにより推定された.(2b)ある特定の自己反応性T細胞クローンに対して反応性が低下しているが,他の自己抗原反応性T細胞クローンには正常に反応する変異株.これらの変異株にはそのT細胞クローンが認識する自己抗原ペプチドが発現していないと考えられるので,野生APC株の自己抗原ペプチドと比較し,自己反応性T細胞クローン(特に,疾患発症に関与するクローン)が認識する自己抗原ペプチドの解析を行なっている.(3)自己反応性T細胞クローンに対する刺激能力は保持されているが,クラスII分子の発現が消失し,同時に外来抗原処理提示機構に欠陥を伴った変異株.外来抗原と自己抗原の処理提示機構が異なった経路により行われている可能性を示す変異株である.クラスII分子のシークエンスでは,ペプチド結合部以外の場所に変異が認められた.この部位の分子構造が外来抗原処理提示に関与している可能性を示唆している.

The function of APC mutant strain was established by the method of gene transformation. The function and structure of APC mutant strain was analyzed.APC strain was used in the development of Abetaz/Aalphad hybrid II molecule. B/WF1 is the origin of anti-T cell and anti-T cell from foreign antigen. (1)An indicator of the disappearance of the antigenicity of T cells and the conditions for the formation of APC mutants are discussed. At the beginning,T cell agglutinates and wild-type APC agglutinates were isolated by magnetic resonance spectroscopy. In this paper, the anti-T cell differentiation agent (EMS) was used to treat APC strains in mixed culture, and the APC strains were produced in mixed culture. (2)In addition to the molecular development of defective plants, the following characteristics of mutant plants were obtained. (2a)Foreign antigen (KLH) processing suggested that the mechanism was abnormal, and the ability of antigen-resistant T cells to stimulate was lost. 1-2 of the binding sites of the variant II molecule are different from each other in DNA sequence. (2b)The specific anti-T cell responses were reduced, and the anti-T cell responses were normal. In comparison with wild APC strains, T cells from these mutant strains recognize their own antigens and analyze their own antigens. (3)The ability of self-reactive T cells to respond to stimuli was maintained, and the expression of CDRII molecules disappeared, while foreign antigen processing cues were absent. Foreign antigen processing suggests that the mechanism of heterosis may be different. The molecular structure of CRII is different from that of the binding part. The molecular structure of this site may be relevant to the possibility of foreign antigen processing.

项目成果

Masao Kimoto,: "MHC heterozygosity and autoimmunity." Immunol.Today. 14. 569-570 (1993)

Masao Kimoto，：“MHC 杂合性和自身免疫。”

Yasuhisa Ichigi.: "Generation of cells with morphological and antigenic properties of microglia from cloned EBV-transformed lymphoid progenitor cells derived from human fetal liver." Cell.Immunol.149. 193-207 (1993)

Yasuhisa Ichigi.：“从来自人胎儿肝脏的克隆 EBV 转化的淋巴祖细胞中产生具有小胶质细胞形态和抗原特性的细胞。”

Tstsuya Matsuo: "Crosslinking of B cell-receptor related MB-1 molecule induces signal transmission through tyrosine kinase pathway in early B lineage cells." J.Immunol.150. 3766-3775 (1993)

Tstsuya Matsuo：“B 细胞受体相关 MB-1 分子的交联通过早期 B 谱系细胞中的酪氨酸激酶途径诱导信号传输。”

Yudai Gotoh,: "Mixed haplotype Abetaz/Aalphad class II molecule in(NZB×NZW)F1 mice detected by T cell clones." J.Immunol.150. 4777-4787 (1993)

Yudai Gotoh，：“通过 T 细胞克隆检测到 (NZB×NZW)F1 小鼠中的混合单倍型 Abetaz/Aalphad II 分子。”J.Immunol.150 (1993)。

Kazuhiko Kuwahara: "Induction of tyrosine phosphorylation in human B lineage cells by crosslinking MB-1 molecule of B cell receptor-related heterodimer complex." BBRC. 197. 1563-1569 (1993)

Kazuhiko Kuwahara：“通过交联 B 细胞受体相关异二聚体复合物的 MB-1 分子来诱导人 B 谱系细胞中的酪氨酸磷酸化。”