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電子顕微鏡によるDNA蛋白質複合体の構造解析

使用电子显微镜对 DNA-蛋白质复合物进行结构分析

基本信息

批准号：
09249209
负责人：
臼倉治郎
金额：
$ 0.83万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09249209/
关键词：
転写 DNA mRNA ポリメラーゼ RFC 電子顕微鏡 UV5 Open Complex

项目摘要

本研究は遺伝子の転写および複製過程を形態学的に明らかにすることを目的として行われた。すなわち、大腸菌のポリメラーゼがDNAとどのように結合するかをイメージングする。また、複写に関与するRFC蛋白の構造解析を行った。具体的には大腸菌のlacUV5のプロモーターを含む約1000ベースのDNAをテンプレートとして、DNA/ポリメラーゼ複合体のclosed complex,Open complex,Initiation complex,Elongation complexを低角度回転蒸着法により電子顕微鏡下でその形態的相違点を明らかにした。この実験系ではヘパリンがない状態ではポリメラーゼは非特異的にDNAに結合するが、DNAに付着しているのではなく、ポリメラーゼはDNAを包み込んでいた。したがって、プロモーター部分に結合したポリメラーゼのみがOpen complexを形成し、他はClosed complexの状態と考えられる。ヘパリンの添加によりOpen complexのみが残され、Closed complexは遊離する。Open complexでは、DNAはポリメラーゼのαα,ββ'サブユニット間に形成される大きなチャンネルを貫通していた。また、3'側で大きくkinkしていることが明らかとなった。3NTPを添加するとInitiation complexへと移行するが、Open complexと形態的な違いはなかった。さらに4NTPを添加しElongation complexに移行させることができ、実際にmRNAが合成されるところを可視化できた。一方、DNAの複製に関与するRFC蛋白も低角度回転蒸着法でおおまかな構造を決めることができた。この蛋白はいくつかのサブユニットが連なるリング上の構造をしており、その真ん中をDNAが貫通するものと考えられる。

In this study, the purpose of this study is to clarify the purpose of the process of replication. This is the first time that DNA has been detected in the first place. Copy, copy, and analyze the RFC protein. The specific lacUV5 microorganisms contain about 1000 yuan of DNA and DNA/ compounds. The closed complex,Open complex,Initiation complex,Elongation complex complex is used to measure the temperature of the microphone by low-angle steaming. Please tell me that you need to know that the DNA is not a special combination, and that the DNA has to pay for the information. Please tell me that the DNA package does not have any information. The combination of the information and the information section shows that the Open complex is formed and the status of the Closed complex is evaluated. Add "Open complex", "disabled", "Closed complex"isolated". Open complex, DNA, and so on, each of which is known as alpha, beta, and so on. Please tell me what to do. 3', please kink, please tell me. 3NTP adds the configuration of "Initiation complex", "moving", "moving", "Open complex". "4NTP" add "Elongation complex" transfer "", "international" mRNA "synthesis"synthesis" can be changed ". One side, DNA copy and RFC protein, low-angle steaming method. The egg whites are not available. They are connected to each other. In the real world, there are some problems in the DNA test.