人工遺伝子導入による視細胞除去マウス網膜の発生にともなう形態変化

通过人工基因转移去除小鼠视网膜的感光细胞发育相关的形态变化

• 批准号: 04670011
• 负责人: 臼倉 治郎
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04670011/
• 关键词: 網膜; トランスジェニックマウス; 発生; 分化; 遺伝子組み換え; 視細胞

視物質遺伝子プロモーター部分(ロドプシン遺伝子の5'側1000塩基)を切り出し、プラスミッド上でジフテリア毒素A部分の遺伝子(dt-a)の上流にのせる。その後、ロドプシンプロモーターに繋がったままのdt-a遺伝子を取り出し、これを3μg/mlの濃度でCD1マウスの受精卵に注入し、トランスジェニックマウスを作製した。生まれてくるマウスに人工遺伝子が組み込まれていることを確認したうえで、生後0日から6箇月まで網膜視細胞を形態的に調べた。生後0〜3日目の網膜ではトランスジェニックと正常の区別は難しいが、生後5日目から7日目にかけて正常マウス網膜では外網状層が形成されるが、トランスジェニックマウス網膜では十分な形成は行われない。これはマウス網膜視細胞の大半を占める杆体視細胞でこのころよりロドプシンの合成が盛んに行われ、同時に人工遺伝子由来のジフテリア毒の合成も行われるため、杆体視細胞が死に陥るためと考えられる。トランスジェニックマウスの杆体視細胞の多くは外節を形成できずに、生後7〜10日目で半分以上が死んでしまう。一方、錐体視細胞は15日目以降でも正常網膜と同じ頻度で観察される。細胞内微細構造もほぼ正常錐体細胞と同じなのでロドプシンの発現はなかったものと思われる。しかし、やはり外節は形成されない。杆体視細胞は生後20日目以降ではほとんど観察されないが、錐体視細胞は生後3箇月ぐらいまで認められる。しかし、6箇月後にはほとんど観察されない。したがって、錐体がロドプシンを発現しないとすると網膜中での杆体視細胞の欠損が錐体視細胞の欠損を招いたことになり、この二種の細胞間は相互依存性があったことになる。また、視細胞の欠損は最終的には網膜の退化を誘発した。一方、ロドプシプロモーター部を含む5'側1000塩基中には組織、細胞特有性を決める遺伝子が含まれていることが明かとなった。

Depending on the material heritage 伝 son プ ロ モ ー タ ー part (ロ ド プ シ ン heritage 伝 son の 5 'side cut 1000 salt base) を り し, プ ラ ス ミ ッ ド on で ジ フ テ リ ア toxin part A の heritage 伝 son の (dt - A) high に の せ る. After そ の, ロ ド プ シ ン プ ロ モ ー タ ー に 繋 が っ た ま ま の dt - a legacy 伝 を son take り し, こ れ を 3 mu g/ml の concentration で which CD1 マ ウ ス の fertilized egg に injection し, ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス を cropping し た. Raw ま れ て く る マ ウ ス に traces of artificial 伝 son が group み 込 ま れ て い る こ と を confirm し た う え で, 0 days after born か ら 6 months ま で retinal visual cell を form に adjustable べ た. 0 ~ 3 days after the date of birth orders の retinal で は ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク と の difference between normal は difficult し い が, was born after the 5 orders か ら 7 orders に か け て normal マ ウ ス retinal で は が outer plexiform layer formed さ れ る が, ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス retinal で は very な line form は わ れ な い. こ れ は マ ウ ス retinal visual cell の accounted for more than half を め る depending on the rod body cells で こ の こ ろ よ り ロ ド プ シ ン の synthetic が sheng ん に line わ れ, at the same time に artificial but 伝 origin の ジ フ テ リ ア poison の synthetic line も わ れ る た め が, rod body cells die に 陥 る た め と exam え ら れ る. ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス の の more depending on the rod body cells く は outer segment を form で き ず に, 7 ~ 10 days after the item で が over half dead ん で し ま う. One side, the pyramidal visual cells で 15 days or less で で normal omentum と and じ frequency で観 observe される. The intracellular fine structure <s:1> ほぼ normal cone cells と and じな <s:1> でロドプシ <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> と われる われる われる と と われる are similar to われる. The outer section of the や や や されな forms されな されな. Depending on the rod body cells は 20 mesh in postnatal で は ほ と ん ど 観 examine さ れ な い が は born after 3 months, the cone cells ぐ ら い ま で recognize め ら れ る. Youdaoplaceholder0 に ほとん 観 観 観 されな されな six months later. し た が っ て, cone が ロ ド プ シ ン を 発 now し な い と す る と omentum in で の depending on the rod body cells の owe loss が cone regards の owe loss を recruit い た こ と に な り, こ の は interdependence between two の cells が あ っ た こ と に な る. Youdaoplaceholder0, visual cell <s:1> underdamage, and eventually に and <s:1> omental degeneration を induce <s:1> た. Party, ロ ド プ シ プ ロ モ ー タ ー department contains を む 5 'side of the 1000 salt base に は organization, cell characteristic を definitely め る heritage 伝 son が containing ま れ て い る こ と が Ming か と な っ た.

项目成果

Jiro Usukura: "Cone Cell Fail to Develop mormally in Trnsgenic Mice Ablated of Rod photoreceptor Cells." Cell.Tiss.Res.

Jiro Usukura：“在去除视杆细胞的转基因小鼠中，视锥细胞无法正常发育。”