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リン酸化による転写調節因子構造変化のイメージング

磷酸化引起的转录调节因子结构变化的成像

基本信息

批准号：
06276209
负责人：
臼倉治郎
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は燐酸化による転写調節因子の活性化過程をイメージングすることである。これまで遺伝子と転写調節因子との結合はゲルシフトなどで予測していたため、結合過程でいかなる形態変化が起こるかは不明であった。そこで、転写調節因子CREBについてはソマトスタチンまたはチロシン水酸化酵素の遺伝子5'側のプロモーター領域を含む約1000塩基を切り出し、結合させたあと、溶液吸着や噴霧法によりマイカ面上に展開し、低角度回転蒸着法や原子間力顕微鏡により観察した。この方法により現在はDNAラセン構造の1/2ピッチ(10塩基対)を一つの単位として再現良く観察可能になった。CREBなどの転写因子は結合するとDNAは極僅か曲げることが明かとなった。また、CREBとDNAの結合は燐酸化により大きな影響を受けなかった。CREBは二量体であるが、球形で中心に溝をもつことがわかった。溝は二量体をつなぐ橋により形成されるのであるが注意深く観察するとさらにその橋の部分から小さな突起が溝に向かって飛び出しているのが、明かとなった。そして、結合に際し、その突起がDNAの二重鎖の水素結合部位に圧するように結合するのではないかと推測できるような画像も得られた。一方、同じ班員である名大分子生物の饗場とは大腸菌の転写調節因子であるCRPとDNAの結合様式についての研究、また阪大微研の岩崎らとはHoliday Junctionへの結合因子RuvA,B,Cの結合様式についての研究も始められた。特に饗場らとの共同研究でCRPの結合により僅かに屈曲したDNAがさらにポリメラーゼの結合により大きく折り曲げられるようすも明かになった。

The aim of this study was to investigate the activation process of phosphorylation regulators. The combination of these factors is predicted, and the combination process is not clear. In addition, CREB can be used as a regulator in the field of hydration enzyme. The field contains about 1000 bases. The solution adsorption method and spray method can be used for surface development, low angle evaporation method and atomic force microscopy. This method is based on the 1/2-point (10-point) structure of the DNA sequence. CREB is the only one that binds to DNA. CREB DNA binding is affected by phosphorylation. CREB The groove and the bridge are formed, and attention is paid to the deep observation. The bridge is formed, and the small protrusion is formed, and the groove is formed, and the light is formed. In the case of DNA binding, it is assumed that the protein binding site of DNA is located in the double lock. The research on the binding pattern of large molecular organisms, such as E. coli, CRP, DNA, and binding factors RuvA,B, and C, has begun. Special study on CRP binding, DNA binding and DNA binding