極低温低角度回転蒸着法による遺伝子転写過程の動的イメージング

低温低角度旋转蒸发法基因转录过程动态成像

• 批准号: 08878123
• 负责人: 臼倉 治郎
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08878123/
• 关键词: 低角度回転蒸着; DNA; 転写因子; RNAポリメラーゼ; 電子顕微鏡; 大腸菌; CAPイメージング

転写複合体の形成は情報伝達系の究極であり、また分子が分子を認識して機能する典型である。このような分子認識過程では構造が極めて重要な役割をはたす。したがって、それらの構造解析は転写を理解するうえで必須である。我々は低角度回転蒸着法を改良して転写複合体の直接観察を試みた。本研究の推進により遺伝子の転写や組み変えといった生命の重要現象が一部ではあるが動的形態変化として捉えられるようになった。本年度は次の二点について研究を行った。(1)CREBとソマトスタチン遺伝子プロモーター領域との結合を三次元的に明らかにした。すなわち、CREBは二量体として機能するが、ロイシンジッパー部分を向き合うように二量体が形成される。これら二量体によって形成されるクレバスの間にDNAを挟み転写因子としての機能を果たすことになる。しかし、多くの観察結果から、ただ挟むだけでなく、捻っていることが考察される。DNAに捻りと屈曲を与えることにより転写開始を増強していることが形態的に予測された。(2)大腸菌のDNAとポリメラーゼの結合を明らかにした。ポリメラーゼは生化学的にβ,β',α,α,δの四つのサブユニットからなることが生化学的に明かとなっている。分子量の違いを基準としてa,b割り当てると二つのαサブユットの上にβとβ'のサブユニットが向かい合って被さった構造となることが明かとなった。この際β,β'とα,αとの間には大きなチャンネルが形成される。そしてこのチャンネルにDNAが挟まれることが形態的に示された。一方δ因子の構造は明らかにできなかったが、δ因子がDNAプロモーター部を認識する機能があること、およびこの因子を外したコア酵素の構造との比較から、α,β間に存在する大きなチャンネルにDNAと共に存在するものと思われる。

The formation of a complex is the ultimate in information transmission, molecular recognition and function. The molecular cognition process is extremely important. The structure analysis of the structure is necessary to understand the structure. We tried to improve the low-angle back-steaming method by directly observing the complex. This study is aimed at promoting the development of life in the form of transformation. This year's second round of research has been conducted. (1)CREB CREB and CREB are two components of the system. The two molecules are formed in the middle of the DNA molecule and the function of the molecule is determined. The results of the investigation are as follows: DNA twist, twist (2)The DNA of E. coli is mixed and mixed. The four elements of biochemistry are β,β',α,α,δ. The molecular weight of the compound is determined by the structure of the compound.β,', α and α are formed in the middle of each other. The result is that there is no evidence of a change in DNA. The structure of delta factor is clear, and the function of delta factor is to recognize the part of DNA. The structure of enzyme of delta factor is different from that of alpha factor and beta factor.

项目成果

Hirako,Y.,Usukura,J.,et al.: "Demonstration of the molecular shape of BP180,a 180-kDa bullous pemphigoid antigen and its potential for trimer formation" J.Biol.Chem.vol.271. 13739-13745 (1996)

Hirako,Y.,Usukura,J.,et al.：“BP180（一种 180-kDa 大疱性类天疱疮抗原）的分子形状及其形成三聚体的潜力的演示”J.Biol.Chem.vol.271。

Yamazaki,A.,Bondarenko,V.A.,et al.: "Possible stimulation of retinal rod recovery to dark state by cGMP release from a cGNP phosphodiesterase noncatalytic site." J.Biol.Chem.(in press.).

Yamazaki,A.,Bondarenko,V.A.等人：“cGNP 磷酸二酯酶非催化位点释放 cGMP 可能刺激视网膜杆恢复至黑暗状态。”

Taya,S.,Taniguchi,Y.,et al.: "Development of γthpe energy filtering TEM." J.Electrom.Microsc.Vol.45. 307-313 (1996)

Taya, S., Taniguchi, Y. 等人：“γthpe 能量过滤 TEM 的开发”。J.Electrom.Microsc.Vol.45 (1996)。