βアドレナリン受容体の機能の解析とその制御メカニズム

β-肾上腺素受体功能及其调控机制分析

• 批准号: 09273210
• 负责人: 長尾 拓
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09273210/
• 关键词: インターナリゼーション; 受容体キナーゼ; βアレスチン; 2-ハイブリッド法; Cl^-チャネル; HEK293細胞

βアドレナリン受容体(β受容体)は3つのサブタイプ(β1,β2,β3)からなっており、サブタイプ間で調節機構が異なっていることが報告されている。β2受容体をHEK293細胞に一過性に発現させアゴニストで刺激すると、受容体は細胞内の小胞に移行した。この過程をインターナリゼーションという。しかし、β1受容体を発現させアゴニストで刺激しても、細胞表面にとどまったままであった。最近、受容体キナーゼによる受容体のリン酸化およびそれに続くβアレスチンの結合がインターナリゼーションを促進することが報告されたので、β1受容体とともに受容体キナーゼとβアレスチンを発現させた。しかしながら、この場合もインターナリゼーションは促進されなかった。また、β1受容体から細胞内のプロリンに富む領域を除去するとインターナリゼーションが起こるようになると報告されていることから、プロリン領域除去の変異β1受容体を調べた。しかし、アゴニスト刺激は何らインターナリゼーションを引き起こさなかった。酵母の2-ハイブリッド法によりβ2受容体のカルボキシ末端と相互作用するタンパク質のクローニングを試みいくつかの候補遺伝子をクローニングした。そのうちの一つはCl^-チャネルをコードしているCLCPであった。CLCPの局在をGreen Fluorescent Protein(GFP)を付加させた融合タンパク質を発現させ調べると、細胞内の小胞、細胞膜、細胞核での発現が確認された。次にβ2受容体のどの部分と相互作用するのか調べたところ、カルボキシ末端より10アミノ酸の部分にCLCPとの相互作用部位が同定できた。Cl^-チャネルはインターナライズした小胞のpH勾配の安定化に寄与していると考えられている。従って、今後β2受容体のカルボキシ末端によるCl^-チャネルの活性化などを測定する必要がある。

The β-receptacle (β-acceptor)

项目成果

Kikkawa,H.: "Differential contribution of two serine residues of wild type and constitutively active β2-adrenoceptors to the interaction with β2-selective agonists." British Journal of Pharmacology. 121(6). 1059-1064 (1997)

Kikkawa, H.：“野生型和组成型活性 β2-肾上腺素受体的两个丝氨酸残基对与 β2-选择性激动剂相互作用的不同贡献。”121(6) (1997)。

Kikkawa,H.: "The role of the seventh transmembrane region in highaffinity binding of a β2-selective agonist TA-2005." Molecular Pharmacology. 53(1). 128-134 (1998)

Kikkawa, H.：“第七跨膜区域在 β2-选择性激动剂 TA-2005 的高亲和力结合中的作用。” 53(1) (1998)。