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ミトコンドリアにおける前駆体プロセシングの分子機構

线粒体前体加工的分子机制

基本信息

批准号：
09267224
负责人：
伊藤明夫
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ミトコンドリアに輸送された前駆体蛋白質の延長ペプチドを切断除去法(プロセシング)し、成熟体にするプロセシングペプチダーゼの前駆体認識の機構と構成サブユニットの役割を解明することを目標としている。本年度は、次の2点について解析した。(1)本酵素により基質として特異的に認識され、特定の位置が切断されるために必要十分な前駆体延長ペプチドの基本構造、(2)本酵素の2つのサブユニット各々の役割と基質結合や活性発現に関与しているアミノ酸の検索。1.リンゴ酸脱水素酵素およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼの延長ペプチドを例に、系統的にアミノ酸を変換した合成ペプチドを用いた解析により、切断点より近位のアルギニンおよび遠位の塩基性アミノ酸、および1位の疎水性アミノ酸が基質として必要な構造であることを提唱してきたが、それらのみを持つペプチドでは切断が見られず、他の必要構造の存在が示唆されていた。今回の解析により、切断位置よりC末端側の2位および3位のアミノ酸(2位はセリン、トレオニン、ヒスチジンなど、3位はトレオニン、セリンなど)も重要な役割を果たしていることを確認した。2.蛍光プローブを付加したペプチド基質を用いて、酵素タンパク質への結合反応を解析した。酵素へは切断反応のKmとほぼ同様の10^<-7>オーダーの解離定数で結合したが、2つのサブユニット単独には30-50倍の解離定数を示した。また、結合したペプチドによる蛍光の消光実験より、基質が酵素の表面ではなく少し奥に結合していることが示され、両サブユニットが協同して基質結合部位を形成していることが示唆された。3.2つのサブユニットについての精製変異酵素を用いた解析により、活性中心金属の結合アミノ酸、基質結合に関与すると思われるグルタミン酸、等の同定を行い、基質の切断点付近はβ-、アミノ末端よりはα-サブユニットが関与していることが示唆された。

A method for removing precursor proteins from mature cells and forming precursor proteins This year, the second two points of analysis. (1)The enzyme is related to substrate specific recognition, specific site cleavage, precursor extension, basic structure,(2) substrate binding, activity development, and acid detection. 1. Acid dehydrator enzyme is used to analyze and cut off the basic acid in the proximal position and the basic acid in the distal position. For example, if you want to cut off the necessary structure, you can show it in the middle. The analysis of this loop shows that the 2-bit and 3-bit acids on the C-terminal side (2-bit, 3-bit, 3-bit 2. The light source is added to the substrate, and the enzyme is added to the substrate. The enzyme breaks the Km of the reaction and the dissociation constant of the reaction is 10-<-7>fold. The dissociation constant of the reaction is 30-50 fold. In addition, the enzyme binding site is formed in a coordinated manner by light extinction, substrate binding, and substrate binding. 3.2 The analysis of enzyme activity, the binding of active center metal to acid, the binding of matrix to acid, and the determination of isoenzyme activity, the cutting point of matrix to β-, α-, and α-.