ラット肝モノアミノ酸化酵素の分子構成と細胞内局在化シグナル

大鼠肝脏单氨基酸酶的分子组成及细胞内定位信号

• 批准号: 01580194
• 负责人: 伊藤 明夫
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01580194/
• 关键词: モノアミン酸化酵素; ミトコンドリア外膜; cDNAクロ-ニング; 細胞内局在化シグナル

神経伝達アミンのレベルの調節に関与しているモノアミン酸化酵素に関して次の3点を明らかにした。(1)A型酵素のcDNAクロ-ニングと塩基配列、アミノ酸配列の決定:既に得られているB型酵素に対するcDNAをプロ-ブに用いて、ラット肝mRNAのcDNAライブラリ-(λgt_<11>)をスクリ-ニングすることにより約2.5kbpのA型酵素に対するcDNAを得た。その塩基配列から得られたアミノ酸配列によると、526残基、分子量59.6kDであった。ウシやヒトのA型酵素および、ラットのB型酵素との相同性はそれぞれ、約87%および約70%であった。A,B両酵素のcDNAを用いてラット各臓器での両酵素のmRNAの発現量を調べたところ、A型酵素は心臓で、B型酵素は肝臓で特に高い発現がみられた。なお、mRNAの大きさは、A型酵素は4.2kb、B型酵素は2.8kbであった。(2)B型酵素の哺乳動物内での発現:B型酵素のFAD結合サブユニットαcDNAを哺乳動物細胞に導入したところ、高い酵素活性の発現がみられ、その活性はミトコンドリアに局在していた。このことは、本酵素がFAD結合サブユニットのみから成ることを示唆している。(3)B型酵素のミトコンドリア局在化シグナルの同定:B型酵素のカルボキシ末端部約30残基に相当するcDNAをチトクロムb_5の親水性部に結合させ、哺乳動物細胞に導入して、発現した融合蛋白質の細胞内局在場所を検討したところ、ミトコンドリアに局在した。これまで、ミトコンドリア蛋白質の局在化シグナルは前駆体のアミノ末端部に存在することが定説となっているが、上記の結果はモノアミン酸化酵素の場合、カルボキシ末端に存在することを示している。

God 経 伝 da ア ミ ン の レ ベ ル の adjust に masato and し て い る モ ノ ア ミ ン acidification enzyme に masato し て の 3 point を Ming ら か に し た. (1) A type of enzyme の cDNA ク ロ - ニ ン グ と salt base columns, ア ミ ノ acid with の decided: both に have ら れ て い る type B enzyme に す seaborne る cDNA を プ ロ - ブ に with い て, ラ ッ ト liver mRNA の cDNA ラ イ ブ ラ リ - (lambda gt_ < 11 >) を ス ク リ - ニ ン グ す る こ と に よ り 2.5 KBP の type A enzyme Youdaoplaceholder0 against するcDNAを gives た. The そ そ base is combined with the ら to obtain the られたア ノ acid is combined with the によると, 526 residue, and a molecular weight of 59.6kDであった. Youdaoplaceholder0 ウシやヒト type A enzyme および and ラット type B enzyme と と are similar in および それぞれ, approximately 87%および approximately 70%であった. Type A, B, struck enzyme の cDNA を with い て ラ ッ ト each viscera で の struck enzyme の mRNA の を 発 now quantity adjustable べ た と こ ろ, enzyme crucial は heart で, type B は liver enzymes viscera で に い tall 発 now が み ら れ た. Youdaoplaceholder0, mRNA <s:1> large なお さ さ さ なお, a-type enzyme なお 4.2kb, b-type enzyme なお 2.8kbであった. (2) type B enzyme の mammals で の 発 now: B type enzyme の FAD combining サ ブ ユ ニ ッ ト alpha cDNA を mammalian cells に import し た と こ ろ, high い enzyme activity の 発 now が み ら れ, そ の active は ミ ト コ ン ド リ ア に bureau in し て い た. こ の こ と は, this enzyme が FAD combining サ ブ ユ ニ ッ ト の み か ら into る こ と を in stopping し て い る. (3) type B enzyme の ミ ト コ ン ド リ ア bureau in turn シ グ ナ ル の with: B type enzyme の カ ル ボ キ シ terminal part about 30 residues に quite す る cDNA を チ ト ク ロ ム b_5 の hydrophilic department に combining さ せ, mammalian cells に import し て, 発 し た の bureau in place in the cell fusion protein を beg し 検 た と こ ろ, ミ ト コ ン ド リ ア に innings At た た. こ れ ま で, ミ ト コ ン ド リ ア protein の bureau in turn シ グ ナ ル は 駆 body before の ア ミ ノ terminal part に exist す る こ と が DingShui と な っ て い る が, written の results は モ ノ ア ミ ン acidification enzyme の occasions, カ ル ボ キ シ end に exist す る こ と を shown し て い る.

项目成果

T.Kuwahara,S.Takamoto,A.Ito: "Primary Structure of Rat Monoamine Oxidase A Daduced from cDNA and Its Epression in Rat Tissues" Agric.Biol.Chem.54. 253-257 (1990)

T.Kuwahara、S.Takamoto、A.Ito：“从 cDNA 得出的大鼠单胺氧化酶 A 的一级结构及其在大鼠组织中的表达”Agric.Biol.Chem.54。