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PDGF受容体およびT細胞受容体を介するホスホリパ-ゼCの活性化機構

PDGF受体和T细胞受体激活磷脂酶C的机制

基本信息

批准号：
01641535
负责人：
佐々木輝捷
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Sapporo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ラット繊維芽細胞WFBは、血小板由来成長因子(PDGF)、バソプレシン、ボンベシンおよびPGF_<2α>の刺激に応答し、細胞内遊離Ca^<2++>濃度([Ca^<2+>]i)の上昇とホスファチジルイノシト-ル4,5ビスリン酸(PIP_2)のホスホリパ-ゼC(PLC)による加水分解を起こす。活性化C-Ha-ras遺伝子でトランスフォ-ムしたWFB細胞では、PDGF刺激に対する[Ca^<2+>]i上昇応答が特異的に消失した。この消失は、ras癌遺伝子による癌化で特異的見られる現象であり、ポリオ-マミドルTにより癌化したWFBでは消失しない。Ras癌遺伝子のコ-ドするras p21タンパク質がどのような機構によりPDGF受容体を介するPLCの活性化に干渉するのかを明らかにする目的で、精製したras p21タンパク質をWFB細胞に導入する実験を行った。12番目にバリンを有する活性化C-Ha-ras p21タンパク質は、合成遺伝子の発現ベクタ-pHR-L9を大腸菌に発現させたものから精製した。ras p21タンパク質をWFB細胞に加え、scrape-loadingにより細胞にras p21タンパク質を封入した。ras p21タンパク質を封入すると、細胞の接着性が増大し、20時間保温する間に細胞数も増加した。それに伴い、PDGF刺激によるイノシト-ルリン酸の生成応答が、牛血清アルブミンを封入した対照細胞に比較して小さくなった。このようなrasタンパク質の効果は、C端8コのアミノ酸が欠落したras p20タンパク質では認められなかった。ras p21タンパク質をscrape-loadingした後、3時間後に膜画分を調整しイノシト-ル脂質の分解を検討した所、グリセロホスホイノシト-ル生成の亢進が認められた。ストレプトリジンO処理によりタンパク質に対し透過性を持たせたWFB細胞を用いて、PDGF刺激及びバソプレシン刺激に伴うイノシト-ルリン酸生成応答に対するras p21タンパク質の効果を検討したが、効果は認められなかった。

Cell WFB, platelet growth factor (PDGF), platelet growth factor PGF _ & lt;2 α & gt; stimulation response, intracellular isolation Ca ^ & lt;2++> concentration ([Ca ^ & lt;2+&gt] ] I) add water to decompose the acid (PIP_2), acid, acid and acid. Activating C-Ha-ras cells, WFB cells, and PDGF stimulates the disappearance of specific responses on [Ca ^ & lt;2+>] I. "disappear", "ras cancer", "WFB", "disappear". The Ras cancer cell was registered with the PDGF recipient, the ras p21 recipient, the WFB cell, the recipient, the recipient, the recipient In 12 order, there are active C-Ha-ras p21 spores, synthetic clones, pHR-L9 bacteria, clones, clones, and clones. Ras p21 cells, WFB cells, ras p21 cells, ras p21 cells, sealed cells. Ras p21 thermostat is sealed, the cell is connected, and the number of cells is increased after 20 hours of heat preservation. After being stimulated by PDGF, the answer was generated from the acid, and the bovine serum was sealed according to the cell size. "ras", "fruit", "C-terminal 8", "acid", "ras p20", "acid", "" ras p20 "," fruit "," acid "," acid "and" acid ". Ras p21 after scrape-loading exposure, 3 hours later, the membrane painting was divided into two parts: the whole process, the decomposition of fat, and the production of hyperactivity. In the first place, the WFB cells were treated with either PDGF or PDGF stimulation. The response to ras p21 was not related to the production of acid.