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T細胞抗原受容体およびNK細胞表面膜受容体を介する細胞内二次シグナルの生成機構

T细胞抗原受体和NK细胞表面膜受体产生细胞内次级信号的机制

基本信息

批准号：
63614529
负责人：
佐々木輝捷
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Sapporo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

(1)ヒトT細胞株JURKAT細胞を0.1μg/mlのコレラ毒素で3時間処理すると、無傷細胞をOKT3抗体で刺激した場合に見られるイノシトールリン酸の生成応答が完全に消失する。JURKAT細胞のコレラ毒素による処理は、GTP結合タンパク質の活性化による膜標品におけるイノシトールリン酸の生成も阻害した。従ってコレラ毒素による阻害を理由に、T細胞受容体・CD3複合体を介するホスホリパーゼC(PLC)の活性化にGTP結合タンパク質の関与を推定する事は出来ない。(2)JURKAT細胞を300nMのホルボールエステル(PMA)で37℃15分間処理すると、無傷細胞を抗CD3抗体で刺激した場合に見られるイノシトールリン酸の生成が対照に比らべて35〜40%に低下した。PMA処理細胞から膜を調整し、GTPγSあるいはフッ化アルミニウムにより、GTP結合タンパク質を活性化した場合のイノシトールリン酸の生成を測定した所、対照に比らべて、それぞれ32%および62%に低下していた。この結果は、T細胞受容体・CD3複合体を介するPLCの活性化ばかりではなく、GTP結合タンパク質を介するPLCの活性化も、JURKAT細胞をPMAで前処理することにより部分的に抑制される事を示している。171型ラジオアイソトープ検出器は、HPLCによる^3H標識イノシトールリン酸の分析に使用した。(3)抗CD3抗体によるJURKAT細胞の刺激に伴い細胞内遊離カルシウムイオン濃度(〔Ca^<2+>]i)の上昇応答が起こる。この測定は、通常1mMのCaイオンを含む等張緩衝液中で行うが、測定を1mM EGTAを含むCaイオンの無い液中で行った所抗CD3抗体刺激後1分付近にピークのある〔Ca^<2+>]i上昇応答は残ったが、それに続いて起こる〔Ca^<2+>]i上昇の維持相が消失した。この結果は、1分付近のピークは細胞内Caイオンの動員相であり、維持相は外液Caイオンの細胞内への流入によるものである事を示している。

(1)T cell line JURKAT cells were treated with 0.1μg/ml of OKT toxin for 3 days, and the production of OKT3 antibody disappeared completely when the cells were stimulated by OKT3 antibody. JURKAT cells were treated with GTP binding agents, and membrane markers were used to inhibit the production of GTP. The reasons for the inhibition of T-cell toxin and the relationship between T-cell receptor and CD3 complex and the activation of GTP-binding protein in PLC are discussed. (2)JURKAT cells were treated at 300nM for 15 minutes at 37℃, and the production of anti-CD3 antibody was 35 ~ 40% lower than that of JURKAT cells. PMA-treated cells are regulated by GTPγS, and the production of GTP γ S is measured by GTP γ S. The results showed that the activation of PLC mediated by T cell receptor CD3 complex, the activation of PLC mediated by GTP binding protein, and the partial inhibition of PMA pretreatment in JURKAT cells. The Model 171 High Performance Liquid Detector is used for the analysis of high performance liquid acids by HPLC. (3)Stimulation of JURKAT cells by anti-CD3 antibody was accompanied by an increase in intracellular free cell concentration ([Ca^<2+>]i). The assay was carried out in isotonic buffer containing 1mM Ca, and the assay was carried out in buffer containing 1mM EGTA. After stimulation by anti-CD3 antibody, the [Ca^<2+>]i increased and the [Ca ^<2 +>]i increased. The results showed that the intracellular Ca ~(2 +) mobilization phase and the extracellular Ca ~(2 +) influx phase were closely related.