シャトルベクタ-pZ189を用いる環境変異原スクリ-ニング系

使用穿梭载体pZ189的环境诱变剂筛选系统

• 批准号: 02202203
• 负责人: 山本 和生
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-02202203/
• 关键词: シャトルベクタ-pZ189; supF遺伝子; IS因子; 塩基置換; フレ-ムシフト; 活性酸素; 脂質過酸化

環境に存在する突然変異原の正体と、その突然変異誘発機構を解明することは、人間環境を保全しようと考えるとききわめて重要な研究である。変異原が遺伝子DNAにどのような損傷を与え、それがどのようにして突然変異に至るかを明らかにするためには、変異原によって誘発された変異体の塩基配列の変化を知ることが必須である。このような目的のために、本研究では、シャトルベクタ-pZ189を用いることとした。先ず第一に、pZ189の変異体同定を容易にかつ安価で行うために、宿主大腸菌を改良した。pZ189上のSuPF遺伝子(約150塩基対の長さ)を標的とすると、自然突然変異の頻度は1.6×10^<ー7>となった。自然突然変異の仕組みを理解するために、変異体の塩基配列変化を12クロ-ンについて調べたところ、IS因子挿入によるものが7個、塩基置換が3個,フレ-ムシフトが1個となった。今後は解析数を増やし、自然突然変異誘発の機構を塩基配列のレベルで明らかにしたい。上記実験系を用いて、環境変異原の作用機構を明らかにすることとした。多くの環境変異原は最終作用原として活性酸素等のラジカルを生成することが知られるようになってきた。そこで、脂質過酸化反応で処理したpZ189を用いることで、ラジカルがDNAにどのような突然変異を生成するかを調べることとした。脂質過酸化処理したpZ189を宿主大腸菌に感染させ、SUPF遺伝子の突然変異を調べたところ3.5×10^<ー7>の頻度で9クロ-ンについて突然変異体をえた。今回改良したpZ189の実験系では、従って、10^<ー7>の頻度のような低い突然変異の誘発でも容易に変異体を分離することができることがわかった。今後は、変異体の数を増やし、脂質過酸化による変異誘発が自然突然変異とどのようにちがうかを明らかにし、同時に塩基配列変化を知ることで、脂質過酸化による突然変異の機構を明らかにしたい。

Environment exist に す る suddenly - different original の Roman と, そ の suddenly - different 発 institutions lure を interpret す る こ と を は, human environment preservation し よ う と exam え る と き き わ め て important な research で あ る. Son - traces of different original が 伝 DNA に ど の よ う を な injury and え そ れ が ど の よ う に し て suddenly - different に to る か を Ming ら か に す る た め に は, - different original に よ っ て 発 lure さ れ た - variant の salt base with column の variations change を know る こ と が must で あ る. こ の よ う な purpose の た め に, this study で は, シ ャ ト ル ベ ク タ - pZ189 を with い る こ と と し た. First, ず. The first に, the pZ189 <s:1> variant is agreed to を, which is easy to に, and 価で. Youdaoplaceholder5, the host escherichia coli を is improved and た. On pZ189 の SuPF heritage 伝 child (about 150 salt の さ) seaborne を mark と す る と, natural suddenly - different の frequency は 1.6 * 10 ^ 7 > < ー と な っ た. Natural suddenly - different の blackstone group み を understand す る た め に, - variant の salt base with columns - the を 12 ク ロ - ン に つ い て adjustable べ た と こ ろ, IS factor scions into に よ る も の が three, seven, salt replacement が フ レ - ム シ フ ト が 1 と な っ た. In the future, the <s:1> resolution number を will increase や や, and sudden natural changes will induce the mechanism を base allocation <s:1> レベ で で bright ら ら に た た た た を. The above record indicates that the experimental department を uses を て, and the mechanism of environmental change is を, ら にする, とと, とと, and た. More く の environment - different original は finally effect the original と し て active acid etc の ラ ジ カ ル を generated す る こ と が know ら れ る よ う に な っ て き た. そ こ で acidification passes, lipids against 応 で 処 Richard し た pZ189 を with い る こ と で, ラ ジ カ ル が DNA に ど の よ う な suddenly - different を generated す る か を adjustable べ る こ と と し た. Lipid acidification passes 処 Richard し た pZ189 を host coliform に infection さ せ, SUPF but 伝 の suddenly - different を adjustable べ た と こ ろ 3.5 * 10 ^ 7 > < ー の frequency で 9 ク ロ - ン に つ い て suddenly - variant を え た. Today back to improved し た pZ189 の be 験 department で は, 従 っ て, 10 ^ 7 > < ー の frequency の よ う な low い suddenly - different の 発 lure で も easy に - variant を separation す る こ と が で き る こ と が わ か っ た. Future は, 1 - の を raised や し, lipid acidification に よ る - different induced 発 が natural suddenly - different と ど の よ う に ち が う か を Ming ら か に し, at the same time に salt base with columns - the を know る こ と で, lipid acidification に よ る suddenly - different の institutions を Ming ら か に し た い.

项目成果

K.YAMAMOTO: "Dissection of functional domains of <Escherichia>___ー <coli>___ー DNA photoreactivating enzyme by linker insertion mutagenesis." Molecular and General Genetics.

K.YAMAMOTO：“通过接头插入诱变对<埃希氏菌>____ <大肠杆菌>____ DNA光活化酶的功能域进行剖析。”

S.AKASAKA,K.YAMAMOTO: "Construction of <Escherichia>___ー <coli>___ー K12 <phr>___ー deletion and insertion mutants by gene replacement." Mutation Research. 254. 27-35 (1991)

S.AKASAKA,K.YAMAMOTO：“通过基因替换构建<埃希氏菌>____<大肠杆菌>____K12<phr>____缺失和插入突变体。”254. 27-35 (1991)