ラジカル発生機能分子と包接タンパク複合系の構造と機能

自由基产生功能分子及包涵蛋白复合系统的结构与功能

基本信息

批准号：
03215206
负责人：
平間正博
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.ネオカルジノスタチン(NCS)複合体をプロトン2DNMR(COSY,HOHAHA,NOESY)を用いて解析した。クロモフォアとアポタンパクの間のNOEから、ジスタンスジェオメトリ-法により両者の結合部位とその粗い構造を求めた。その結果、(1)アポタンパクは揺りかご状の三次構造を持ち、4本のβストランドからなる疎水性ポケット(βシ-ト)の中にクロモフォアがエポキサイド側を下にして会合している。この点ではコンピュ-タ-モデリングの結果と同じであるが、クロモフォアのコア部分の向きは、前後が完全に逆であることが分かった。(2)しかも、疎水性のポケットの底に位置しているのはナフトエ-ト部位であり、Trp39やPhe52とπスタッキングできる位置にはないが、近接している。edge‐to‐face型の相互作用があるように見える。両者の結合に一番重要な部位がナフトエ-トであることを示している。(3)親水性のアミノ糖とカルボネ-トは、ポケットの入り口に位置している。アミノ酸のNーメチル基(アンモニウム塩)は、自らコア-の12位を遮蔽する立体配座にあり、求核攻撃から守る役割を担っている。(4)さらに、NーメチルとAla101やGly102との間にNOEが見えて来たので、その近辺のル-プ構造はN-メチル側に析れ曲がってクロモフォアを押え込んでいる可能性がある。その変化にはAsp99との間のイオン結合が寄与していると考えられる。2.クロモフォアのナフトエ-トおよびN-メチルフコサミン部を合成し、シクロぺンタンジオ-ルに結合させた。それらモデル化合物とアポタンパクとの結合定数を求めた結果、アポタンパクとの特異的結合の鍵を握るのはナフトエ-ト部位であることが明らかとなった。

1。使用质子2D NMR（Cozy，Hohaha，Noesy）分析新层替替汀（NCS）复合物。两者及其粗糙结构的结合位点是使用发色团和载脂蛋白之间NOE的距离几何方法确定的。结果，（1）载脂蛋白具有摇篮状的三级结构，并且发色团与环氧化物侧的杂化伴侣在疏水口袋（β-Syte）中，由四个β链组成。在这方面，结果与计算机建模的结果相同，但是发现发色团核心部分的方向完全逆转。（2）此外，萘地点位于疏水口袋的底部，尽管它不能用Trp39或Phe52堆叠的位置，但它靠近它。它似乎具有边缘式类型的交互。这表明两者之间结合的最重要部分是萘。（3）亲水性氨基糖和碳酸盐位于口袋的入口。氨基酸的N-甲基盐（铵盐）处于构象状态，可以掩盖核心的第12位，并在保护其免受亲核攻击的情况下发挥作用。（4）此外，NOE出现在N-甲基和Ala101和Gly102之间，因此附近的环结构可能会沉淀并倾向N-甲基侧，从而将发色团推到上面。据信，与ASP99的离子键有助于这一变化。 2。发色团的萘和n-甲基二糖胺部分合成并结合到环戊二甲苯。确定了这些模型化合物和载脂蛋白之间的结合常数，并揭示了萘甲构剂是特异性结合与载脂蛋白的关键。