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蛋白質部分による鉄ー硫黄クラスタ-の物性と反応性の制御機構

蛋白质部分对铁硫簇物理性质和反应性的控制机制

基本信息

批准号：
03241216
负责人：
福山恵一
金额：
$ 0.83万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

フェレドキシン(Fd)は鉄と硫黄からなるクラスタ-を持ち、光合成系や窒素固定系において電子伝達の役割を果している。このクラスタ-の機能や性質が、それを取り囲むペプチド構造によっていかに制御されているかを明らかにするため、光合成細菌Rhodofacter capsulatusのFd(FdIとFclII)をとりあげた。本研究では分子遺学的手法でこれらのFdの生理学的意義を明らかにすると同時に、化学的性質を調べるために大量発現系を構築した。合成オリゴヌクレオチドを用いて、本細菌のゲノムのコスミドライブラリ-をスクリ-ニングすることにより、Fd遺伝子を含む断片を単離し、その塩基配列を決定した。FdI遺伝子(fdxN)の他に、2つのオ-プンリ-ディングフレ-ム(fdxCとURF1)が含まれていた。fdxNおよびFdxC遺伝子にカナマイシン耐性遺伝子を挿入することにより、これらの遺伝子を破壊したミュ-タントを得た。これらのミュ-タントは窒素固定能が著しく低下しているが、アンモニアなどの固定窒素源があると、光照射嫌気的条件下でも、暗所で好気的条件下でも、野生株と同じ生育をする。またfdxNまたはfdxCを持つプラスミドをこれらのミュ-タントに導入すると、窒素固定能が回復した。本実験から、窒素固定能にはfdxNおよびfdxC遺伝子の両方が必要であること、またこの系を用いてミュ-タント蛋白の生理活性を評価できることが示された。本細菌のFdの性質を化学的に理解するため、本細菌の光化学中心をコ-ドする遺伝子群の持つ強力なプロモ-タ-領域を含むシャトルベクタ-pTSVシリ-ズを開発した。これらにfdxNなどを含むDNA断片をサブクロ-ンし、対応する蛋白を多量に発現することができた。現在種々のミュ-タント蛋白を発現させ、これらの性質を調べている。

In this paper, we use the method of Fd, sulfur, sulfur, asphyxiate, asphyxium, asphyxium, This is the first time to determine whether or not to use Rhodofacter (FdIase FclII) as an indicator to determine whether or not to treat the disease. The purpose of this study is to understand the meaning of physiology in molecular biology. It is clear that there are a large number of Fd diseases in the same time and in the same time. The synthesizer contains fragments, isolates, and the base column, which is determined by the use of fragments and Fd. The FdI child (fdxN) contains the following words: the other, the second, the second and the second. FdxN, FdxC, patience, patience and patience. The asphyxiant can be fixed under the conditions of low temperature, low temperature, low temperature The fdxN was fixed with asphyxiate, and the asphyxiating hormone was fixed. This method of fdxN and asphyxiant fixation can be used in the treatment of fdxN and asphyxiate, which can be used in the treatment of essential diseases. The understanding of the chemistry of Fd in this laboratory, the subgroup of the center of photochemistry of bacteria, the subgroup of bacteria in the center of photochemistry, and the subgroup of bacteria in the center of photochemistry, the subgroup of bacteria in the center of photochemistry, the subgroup of bacteria in the center of photochemistry, the subgroup of bacteria in the center of photochemistry. The fdxN contains DNA fragments, protein, etc. At present, many kinds of protein have been detected, and there is a significant difference between the two groups.