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核マトリックス蛋白質による核内分子複合体の構築機構

核基质蛋白组装核分子复合物的机制

基本信息

批准号：
07282207
负责人：
北川泰雄
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒトおよびマウスの核内タンパク質としてクローニングしたN/MAXは多様な機能性領域を持つタンパク質である。すなわち、a)Cのクラスターを認識して2本鎖DNAに結合する領域、b)スプライシング因子に見られるアルギニン・セリンに富むRS領域、c)hnRNPに見られるポリミジン結合モチーフを持つMH2領域、d)酸性核マトリックス蛋白質であるマトリン3と相同なMH1、MH2およびMH3領域、e)LVTVDEVIEEEDLの配列が繰り返すAcidicrepeat領域、f)亜鉛フィンガーに類似した領域。N/MAX組換体の抗体は核当たり数百個の顆粒状構造体を蛍光染色し、この複合体は核分裂時に凝集クロマチンから排除されて細胞質に拡散し、分離を完了した複製クロマチンに再会合して娘核内に収納される。これらの特徴は、N/MAXが染色体の特定DNA領域やRNA分子を組み込んだ分子複合体に含まれて何らかの核内反応の場を形成していることを示す。本研究ではN/MAXに関して以下の研究実績を挙げた。N/MAXの各種領域を"biteprobe"とするTwo-Hybrid Systemで、スプライシング因子であるSF2と同様に、RSを含む領域を介して32kDaのタンパク質(SF2-p32)と相互作用することが判明した。このことは、N/MAXがpre-mRNAを中心に形成されるスプライシオソームの構成因子であることを示した。これをさらに検討するために以下の実験を行った。1)HeLa細胞の核抽出液および人工pre-mRNAからなる試験管内スプライシング反応系を構築し、N/MAX抗体の添加によるスプライシング反応の阻害を検討した。微弱な反応抑制効果を見たが完全阻害を確認するには至らなかった。2)N/MAXでは、hnRNP/IおよびLに見られるポリピリミジンを認識するRNA結合モチーフのコア配列が3回繰り返している(MH2)。スプライシングで切り出されるpre-mRNAのイントロンの3'側では、一般にピリミジン含量が高い。これらのことは、N/MAXがMH2を介してイントロン配列の3'側におけるスプライシオソーム構造の構築に寄与している感応性を示唆する。そこでN/MAXとマトリン3のMN2配列を含む組み換え体が選択的に結合するRNA配列をSELEX法で決定しようとし、取りあえず、マトリン3のMH2領域がポリピリミジン配列に結合することを確認した。3)最近、RothらはRS領域を持つタンパク質に対する新しいモノクロナール抗体を作製し、スプライシオソームに十数個のRSタンパク質の存在を新たに示唆した。この中に、200kDa以上のサイズを持つものがあることを報告しているので、この抗体の分与を受けてN/MAXとの交叉性を検討した。核抽出液を用いた予備実験では、Rothの示した200kDa以上のRSタンパク質がN/MAXであることが示唆された。

N/MAX is the most versatile functional domain. a) C-DNA binding domain, b) P-DNA binding domain, c)HnRNP binding domain, d) acidic DNA binding domain, e) LVTVDEVEDL binding domain, f)HnRNP binding domain, d) acidic DNA binding domain, e) LVTVDEVEDL binding domain, f) HnRNP similar domain. The N/MAX group consists of hundreds of granular structures that are stained with light, and the complex that is separated from the cytoplasm when the nucleus is divided. The characteristics of this gene are: N/MAX, chromosome specific DNA domain, RNA molecule assembly, molecular complex, and nuclear inversion field formation. This study is related to N/MAX and the following research results are presented. N/MAX's various domains are "biteprobe" and "Two-Hybrid System", and the SF2-p32 interaction is identified by the SF2-p32 interaction factor. The expression of N/MAX in the pre-mRNA center was determined by the expression of N/MAX in the pre-mRNA center. The following is a list of activities to be carried out: 1) Construction of HeLa cell nuclear extract and artificial pre-mRNA expression system in vitro, and investigation of N/MAX antibody addition and inhibition of HeLa cell nuclear extract. A weak reaction to the attack. 2)N/MAX, hnRNP/I, L, RNA binding, RNA binding, RNA binding. The 3'side of the pre-mRNA gene is usually high in the pre-mRNA gene. In this case, N/MAX = MH2, N/MAX = MH The N/MAX and MN2 arrays include the selected RNA arrays, and the selected RNA arrays are determined by SELEX. 3)Recently, Roth's RS domain has been developing new technologies for the production of anti-RS antibodies. More than a dozen RS domains have been developed. This paper discusses the interaction between the antibody and the receptor N/MAX in the medium and above 200kDa The nuclear extract is prepared for use in the presence of a 200kDa or higher RS protein.