核マトリックスの微細構造の解明には新たな無包埋免疫電顕法確立が必要である

需要一种新的非包埋免疫电子显微镜方法来阐明核基质的精细结构。

• 批准号: 18659049
• 负责人: 近藤 尚武
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18659049/
• 关键词: 無包埋切片電顕法; 可溶性タンパク; ポリエチレングリコール; 網状微細構造; クロマチン線維; タンパク濃度; 無包埋; 免疫電顕; 核マトリックス; 電顕立体観察; PEG法

本研究代表者が開発改良続けてきた無包埋切片電顕法は、一過性包埋のポリエチレングリコールの脱包埋を完全に遂行することが方法論上の最後の課題であったが、脱包埋時の適度加温により解決出来て、電顕最終像の質が格段に向上・安定した。これまでの自身による本法での各種組織細胞の細胞質の観察から、小器官と既知細胞骨格線維と細胞膜との間の細胞内領域を占める可溶性タンパクが、その構成分子の如何に拘らずその総濃度に比例した密度の網構造を電顕上示すこと、及びその場のタンパクがゾルかゲルの状態により各々粗い網か密な網を連続して示すことを見出した。加えて、従来の電顕像ではこれらの網の電子密度がエポンのと大差無いので明瞭視出来ずに注目されなかったと結論づけた。これを踏まえて本研究で細胞核を精査した結果、クロマチンが密集したとされるヘテロクロマチン領域は、エポン切片上では高電子密度の略一様ないし密な粒子状の像を呈するだけだが、本法ではクロマチン線維に相当する太さのものが糸塊状になっているのが立体観察で確認できた。一方で、クロマチンが疎に配列するとされるユークロマチン領域は太さが多様な線維の網として本法では現れ、おそらくクロマチン線維であろう比較的太い線維が疎に配列して、より細い線維が前者の配列空隙を網状に占めていた。エポン電顕像で細胞種により明暗種々の程度を示す核に対応して、本法電顕像では各々が疎ないし密な網状を呈した。これらの結果から、生化学的な核内可溶性タンパクが細胞内のと同様に、その組成に拘らずに総濃度に比例した目の細かさ・密さを示す網構造を呈すると結論づけた。核内可溶性タンパクのいくつかの分子の抗体(京大竹安研の核網羅的解析により得た抗体各種)およびクロマチン構成タンパク抗体を用いて、免疫電顕的に上記の核内網構成線維のどの太さのものに夫々が局在するかを目下検討中である。

This study modified 続 represent が open 発 け て き た no embedding slice electric は 顕 method, transient embedding の ポ リ エ チ レ ン グ リ コ ー ル の embedding を に carries out completely off す る こ と が methodology の finally の subject で あ っ た が, embedding の appropriate heating に よ solve り て, electricity 顕 eventually like の qualitative が lattice に upward, settle し た. こ れ ま で の itself に よ る provisions で の various tissue cells の cytoplasm の 観 examine か ら, small organs と know both cell skeleton line d と membrane と の を の cells between field of め る soluble タ ン パ ク が, そ の constitute の how に detained ら ず そ の に 総 concentration ratio し た density の net structure shown on を electric 顕 す こ と and び そ の field の タ ン パ ク が ゾ ル か ゲ ル の state に よ り each 々 coarse い net か dense な net を even 続 し て in す こ と を shows し た. Add え て, 従 to の electric 顕 like で は こ れ ら の net の electron density が エ ポ ン の と big difference い の で clear see out ず に attention さ れ な か っ た と conclusion づ け た. Tread こ れ を ま え て で nucleus を fine check this study し た results, ク ロ マ チ ン が intensive し た と さ れ る ヘ テ ロ ク ロ マ チ ン は, エ ポ ン slices で は の high electron density slightly a others な い し dense な particle shape の like を is す る だ け だ が, this law で は ク ロ マ チ ン line d に quite す る too さ の も の が si block に な っ て い る の が stereo 観 Check で to confirm で た た. で, ク ロ マ チ ン が 疎 に match column す る と さ れ る ユ ー ク ロ マ チ は ン field too さ が others more な line d の と し て in で は れ, お そ ら く ク ロ マ チ ン line d で あ ろ う comparison too い line d が 疎 に match column し て, よ り fine い line d が former の を mesh に match column gap of め て い た. エ ポ ン electric 顕 like で cells of に よ り kind of light and shade 々 を の degree in nuclear に す 応 seaborne し て, this electric 顕 like で は each 々 が 疎 な い し dense な mesh を show し た. こ れ ら の results か ら, biochemistry な nuclear soluble タ ン パ ク が intracellular の と with others に, そ の composition に detained ら ず に に 総 concentration ratio し た の fine か さ, dense さ を を す network structure is indicated す る と conclusion づ け た. Nuclear in soluble タ ン パ ク の い く つ か の molecular の antibodies (Beijing greater Ann research の nuclear snare parsing に よ り various た antibody) お よ び ク ロ マ チ ン constitute タ ン パ ク antibody を with い て, immune electric 顕 に written の nuclear network line d の ど の too さ の も の に husband 々 が bureau in す る か を now beg in 検 で あ る.

项目成果

What we have learned and will learn from cell ultrastructure in embedment-free section electron microscopy

• DOI: 10.1002/jemt.20572
• 发表时间: 2008-06-01
• 期刊: MICROSCOPY RESEARCH AND TECHNIQUE
• 影响因子: 2.5
• 作者: Kondo，Hisatake

Altered emotional and behavioral responses in mice lacking brain type fatty acid binding protein gene

缺乏脑型脂肪酸结合蛋白基因的小鼠情绪和行为反应发生改变

• 发表时间: 2006
• 期刊: Eur J Neurosci 24
• 作者: Owada Y;et al.
• 通讯作者: et al.

First disclosure of lipid droplet substructure and myelin translucency in embedment-free section electron microscopy

首次在免包埋切片电子显微镜中揭示脂滴亚结构和髓磷脂半透明性

• 发表时间: 2008
• 期刊: Tohoku J Exp Med 214
• 作者: Kondo H;Iwasa H;Saino-Saito S
• 通讯作者: Saino-Saito S

Epidermal-type fatty acid binding protein as a negative regulator of IL-12 production in splenic dendritic cells of mice

表皮型脂肪酸结合蛋白作为小鼠脾树突状细胞 IL-12 产生的负调节因子

• 发表时间: 2006
• 期刊: Mol Cell Biochem 345
• 作者: Kitanaka N;et al.
• 通讯作者: et al.

Embedment-free section electron microscopy.

免包埋切片电子显微镜。

• DOI: 10.1093/jmicro/dfl030
• 发表时间: 2006
• 期刊: Journal of electron microscopy
• 作者: H. Kondo