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転写終結RNAシグナルの機能構造

转录终止RNA信号的功能结构

基本信息

批准号：
06258209
负责人：
饗場弘二
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1)転写終結機能およびmRNA安定化機能に関与するタ-ミネーター構造のエレメントを解明する目的で、大腸菌のcrp遺伝子の転写タ-ミネーターの変異体を数種構築した。変異タ-ミネーターは、ステム構造を破壊したもの3種とTのクラスターを破壊したもの2種である。2)変異タ-ミネーターな断片をlacZおよびgalKをレポーターとする転写終結機能検定用のプラスミドにクローニングしてin vivoにおける転写終結機能を定量的に解析した。上記の変異はいずれも転写終結能を大きく低下させることが明らかになり、ステム構造およびTのクラスターの双方が転写終結機能にとって重要な要素であることが確認できた。3)変異タ-ミネーターがcrpオペロンの発現に及ぼす影響を、タンパク質およびmRNAレベルで定量的に解析した。ステム構造を破壊した変異体ではcrpオペロンの発現の低下が見られたのに対し、Tクラスターを破壊した変異体では影響がなかった。また、前者のcrpオペロンの発現の低下はcrp mRNAの安定性が低下したことにより引き起こされることを明らかにした。この結果から、TクラスターはmRNAの安定化に関与しないこと、いいかえると転写終結機能とmRNAの安定性を規定するRNA(DNA)シグナルは同一ではないと結論した。4)タ-ミネーター領域の下流にステム構造形成可能な配列が存在するとmRNAの3'末端がその部分までシフトすることをノーザンプロット法およびS1マッピング法により見いだした。このことは、in vivoにおける転写はTクラスター部分で終結するのではなく、Tクラスターを越えて進行したのちプロセシングによりmRNAの3'末端が生成されていることを示すものである。

1) Several kinds of structures related to the function of transcription termination and mRNA stabilization, such as the structure of transcription system and the structure of transcription system of E. coli crp gene. There are three kinds of different structures in the world. 2) Different-generation fragments, lacZ and galK, write termination function, determine the use of the selection process, in vivo, write termination function, quantitative analysis The above notes are different from each other in that the writing termination function is large and low, and the structure of the writing termination function is large and low. 3) The expression and quantitative analysis of CRP gene in different genes The structure of the system is different from that of the system. The expression of crp mRNA was lower than that of the control group. The results show that RNA(DNA) is related to mRNA stabilization and mRNA termination function. 4) The downstream structure of the mRNA domain may be formed by the presence of a 3'terminal portion of the mRNA. The expression of mRNA at the 3'-terminal end of the gene is expressed in vivo.