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転写終結RNAシグナルの機能構造

转录终止RNA信号的功能结构

基本信息

批准号：
05265213
负责人：
饗場弘二
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05265213/
关键词：
転写ターミネーターヘアピン構造 Uクラスター mRNA安定性 RNAプロセシング

项目摘要

1)プラスミド上のcrp遺伝子の転写終結領域にいくつかの制限酵素部位をPCR法により導入し、変異ターミネーター作製のための系を確立した。2)このプラスミドの制限酵素部位と合成DNAおよびPCRを利用して、変異ターミネーターを作製した。今回はヘアピン構造のステム部分およびTのクラスターを変えた変異ターミネーターを数種構築した。3)変異ターミネーターDNA断片をlacZおよびgalKをレポーターとする転写終結機能検定用のプラスミドにクローニングしてin vivoにおける転写終結機能を定量的に解析した。また、変異ターミネーターがcrpオペロンの発現(mRNAの安定性)に及ぼす影響を定量的に解析した。この結果、T(U)のクラスターの部分的欠失が転写終結機能を大きく低下させるが、mRNAの安定性には影響しないことが明らかになった。逆にステム部分の変異体のひとつは比較的強い転写終結能を示す一方、mRNAの安定性を顕著に下げることが判明した。これらの結果は、転写終結機能とmRNAの安定性を規定するRNA(DNA)シグナルが同一ではないことを示しており、今後の解析の糸口が得られたと考えている。4)mRNAの3'末端には一般にポリUが検出されることからRNAポリメラーゼはターミネーター領域のTクラスター部分で転写を終結すると広く信じられているが、転写終結能の解析を行なう中で、転写ははるか下流まで進行しており、3'末端の生成はRNAのプロセシングによることを示すデータを得た。

1) PCR method for the introduction of restriction enzyme sites on the crp gene on the top of the gene and the establishment of a system for the production of different enzymes. 2) The restriction enzyme site of the gene and the synthesis of DNA and PCR are used to control the production of different enzymes. Now, there are several kinds of structures in the structure. 3) DNA fragment analysis and galK analysis of DNA termination function in vivo The expression of mRNA and the quantitative analysis of its effects on the development of CRPs As a result, T(U) gene expression was significantly reduced due to the lack of transcription termination function, and mRNA stability was affected. The stability of mRNA can be determined by comparing the expression of mRNA with that of other genes. This result demonstrates that RNA(DNA) molecules are the same as those that regulate the termination function and the stability of mRNA, and provides information for future analysis. 4)mRNA 3'terminal end of the general reverse U detection, reverse RNA transcription, reverse RNA transcription.