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グルコース飢餓における赤血球型糖輸送担体(GLUT1)発現増強機構の解析

葡萄糖饥饿期间红系糖转运蛋白（GLUT1）表达增强的机制分析

基本信息

批准号：
06261222
负责人：
清野裕
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至 1995
项目状态：
已结题

项目摘要

腫瘍組織では赤血球型糖輸送担体(GLUT1)遺伝子発現が増強し腫瘍増殖をエネルギー面で支えていることを研究者代表者らは報告しているが、この増強機構には低グルコースによるストレス負荷が重要な役割を果たしている。インビトロでもHepG2細胞を各種グルコース濃度で培養すると、低グルコースでは赤血球型糖輸送担体(GLUT1)遺伝子発現が、有意に増強することを認めた。そこで既に単離したGLUT1遺伝子より得られたDNA断片をluciferase発現プラスミドに挿入しHepG2細胞に遺伝子導入することにより転写活性を検討したところ-318から+180の約500bpにGLUT1遺伝子発現の強い転写活性部位を認め、かつこの部位が低グルコース刺激によるGLUT1発現増強に関与していることを認めた。この部位はGLUT1と同様に低グルコースで発現が増強するGRP78やGRP94の遺伝子上流域と相同性を有する部分は認められなかった。さらに、この約500塩基対のGLUT1遺伝子転写調節領域のDNAを制限酵素により切断し、互いに重複するDNAプローブを調製し、HepG2細胞より精製した核抽出物を用いてゲルシフト・アッセイを行ったことろ、いずれのプローブに対しても核蛋白の結合が認められたため、引続きDNase Iフット・プリント法によりその結合部位を検討した。この結果、数カ所に渡ってDNase Iによる消化が弱い部位をみとめ、特に4カ所では中心部にTRE様の配列が認められた。今後、低グルコース刺激に最も重要な部位を決定し、さらにGRPファミリーとの調節機構の違いを検討する予定である。

In the organization, the red blood cell glucose transporter (GLUT1) was used to improve the safety of human colonization. the representative of the researchers reported that the organization was responsible for the development of red blood glucose transporters (red blood glucose transporters). It is intended to strengthen the performance of red blood cell glucose transporters (GLUT1) by using different levels of HepG2 cells, such as red blood cell glucose transporter (RBC) and low temperature glucose transporter (RBC). Both the DNA fragments and the luciferase fragments show that the HepG2 cells are not affected by the 500bp fragments. The 500bp GLUT1 fragments show that the active parts are strongly localized, and the GLUT1 is enhanced by the stimulation of the active parts. The location of the GLUT1 is the same as that of the lower part of the watershed. It is shown that there are some similarities in the upper basin of the GRP78 GRP94 area. In the field of GLUT1, the enzyme restriction enzyme was cut off, DNA was cut off, HepG2 cell was used to detect the nuclear extract, and the nuclear extract was used to detect the activity of the enzyme. In this paper, we introduce the method of using DNase I to make sure that the combination of the two parts is very difficult. According to the results of the experiment, the number of DNase I digested weak parts and the central TRE parts of the special 4 samples were assigned to each other. In the future, the most important part of the low-voltage stimulus is determined, and the GRP is determined. The organ is responsible for the prediction of the target.