ソマトスタチンによる抗腫瘍効果の分子機構に関する研究

生长抑素抗肿瘤作用的分子机制研究

• 批准号: 08877153
• 负责人: 清野 裕
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08877153/
• 关键词: ソマトスタチン; ソマトスタチン受容体; オクトレオチド; MAPキナーゼ

ソマトスタチンにより腫瘍の増殖が抑制されることが明らかとなっているがその詳細な作用機序は未だ不明な点が多い。そこで本研究においては、5種類のソマトスタチン受容体遺伝子を利用して、ソマトスタチン受容体発現細胞株を樹立し、その細胞株を用いてそれぞれの受容体と共役する細胞内情報伝達系を明らかにする事によりソマトスタチンアナログによる腫瘍増殖抑制機構を解明する事を目的とした。まず、内分泌腫瘍において高頻度に発現の認められたSSTR1およびオクトレオチドに対して最も高親和性を有するSSTR2の2種類のソマトスタチン受容体遺伝子サブタイプをそれぞれ発現ベクター(pCMV6b)に組み込んだ。このプラスミドDNAをネオマイシン耐性遺伝子とともに、Chinese hamster ovary(CHO)細胞にリポフェクチンを用いてトランスフェクションし、G418を負荷することによりそれぞれ12個ずつの細胞株を得た。これらの24個の細胞株についてソマトスタチンとの結合実験を行い目的のソマトスタチン受容体を発現する細胞株を選別した。さらにソマトスタチン負荷時の細胞内cAMP濃度を測定することにより、ソマトスタチン受容体を大量にかつ機能的に発現する細胞株確立した(CHO-SSTR1)。またSSTR2発現細胞株についてはソマトスタチンとの結合は認められたが、cAMPの低下は認められなかった為、さらにGi1遺伝子を導入したところcAMPの低下が認められたため、この細胞株をCHO-SSTR2とした。このようにしてSSTR1およびSSTR2を発現する細胞株の樹立に成功した。この2つの細胞株にソマトスタチンを負荷しMTTアッセイを行った結果、MTT活性の低下は認められなかった。さらに現在ソマトスタチン負荷時のMAPキナーゼ活性を測定中である。

ソ マ ト ス タ チ ン に よ り swollen sores の raised colonization が inhibit さ れ る こ と が Ming ら か と な っ て い る が そ の detailed な が machine sequence は だ not unknown な point い. そ こ で this study に お い て は, 5 kinds の ソ マ ト ス タ チ ン by let body heritage 伝 son を using し て, ソ マ ト ス タ チ ン 発 now let body cell lines を establish し, そ の cell lines を with い て そ れ ぞ れ の by let body と す total service intelligence 伝 る cell of を and Ming ら か に す る matter に よ り ソ マ ト ス タ チ ン ア ナ ロ グ に よ る swollen sores raised colonization curb institutions を solution The purpose of する is を and と た. ま ず, endocrine swollen sores に お い て high frequency に 発 の now recognize め ら れ た SSTR1 お よ び オ ク ト レ オ チ ド に し seaborne て も most high affinity を have す る SSTR2 の 2 kinds の ソ マ ト ス タ チ ン by let body heritage 伝 son サ ブ タ イ プ を そ れ ぞ れ 発 now ベ ク タ ー (pCMV6b) に group み 込 ん だ. こ の プ ラ ス ミ ド DNA を ネ オ マ イ シ ン patience heritage 伝 son と と も に, Chinese hamster ovary (CHO) cells に リ ポ フ ェ ク チ ン を with い て ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン し, G418 を load す る こ と に よ り そ れ ぞ れ 12 ず つ の cell lines を た. こ れ ら の 24 の cell lines に つ い て ソ マ ト ス タ チ ン と の combination be 験 を line い purpose の ソ マ ト ス タ チ ン by let body を 発 now す る cell lines を choose don't し た. さ ら に ソ マ ト ス タ チ ン load の cAMP in the cell concentration determination を す る こ と に よ り, ソ マ ト ス タ チ ン from let body を に か つ functionary に 発 now す る cell lines established し た (CHO - SSTR1). ま た SSTR2 発 now cell lines に つ い て は ソ マ ト ス タ チ ン と の combining は recognize め ら れ た が, cAMP の low は recognize め ら れ な か っ た for, さ ら に Gi1 posthumous son 伝 を import し た と こ ろ cAMP の low が recognize め ら れ た た め, こ の cell lines を CHO - SSTR2 と し た. <s:1> ように ように てSSTR1およびSSTR2を emergence する cell line <e:1> establishment に successful た た. こ の 2 つ の cell lines に ソ マ ト ス タ チ ン し を load determined by MTT ア ッ セ イ を line っ た results, determined by MTT active low の は め ら れ な か っ た. Youdaoplaceholder0 is in the を determination of <s:1> MAPキナ を ゼ ゼ ゼ activity at <s:1> load である.

项目成果

A.Kubota,et al.: "Effector Coupling of Somatostatin Receptor Subtypes on Human Endocrine Tumors." Metabolism. 45(8). 42-45 (1996)

A.Kubota 等人：“生长抑素受体亚型对人类内分泌肿瘤的效应器偶联”。