定量的PCRによるホルモン耐性前立腺癌のステロイドホルモンレセプターの機能解析

通过定量PCR对激素抵抗性前列腺癌中类固醇激素受体进行功能分析

基本信息

批准号：
14770804
负责人：
山田徹
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Gifu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

前立腺癌のホルモン治療への耐性化はandrogen receptor (AR), estrogen receptor (ER) isozymeα、isozymeβ, progesterone receptor (PR)が関与していると考えられているが,これらレセプターの前立腺癌における機能は不明であり、ホルモン耐性化との関連は解明されていない。われわれは既にendrogen receptor依存性前立腺癌細胞株からホルモン非依存性の株を作製した。またこの親株とわれわれが作製した非依存株との間での遺伝子発現の相違を、DNAマイクロアレイを用いて検討した(未発表)。平成14年度は以下のことを施行中である.1)リアルタイム定量的PCR(Lightcycler)法用の測定系の確立androgen receptor (AR), estrogen receptor (ER) isozymeα、isozymeβ, progesterone receptor (PR)の発現量を各receptorのmRNAの発現量として定量的に測定する.その方法としてrealtime PCR (Lightcycler)を使用する.各細胞に発現しているtotal mRNAをreverse transcriptionにてcDNAにし,このcDNA中の各レセプター遺伝子の特異的な部分をPCR法にて増幅するため,特異的なprimerを各レセプター毎に2つづつ設計,作製した.さらに定量する時により特異性を高めるため,hybridization probe法を使用し、各遺伝子に対する特異的な蛍光標識プローベを設計,作製した.以上のprimer, probeが測定系として機能するために、realtime PCR(Lightcycler)における至適条件の調整が必要である.ホルモン感受性およびホルモン耐性前立腺癌細胞株を使用し,抽出したmRNAを用いてLightcyclerの至適条件を調整し,測定系を確立した.2)ホルモン耐性前立腺癌細胞株を用いたステロイドレセプターの発現量の検討親株と、樹立したホルモン耐性前立腺癌細胞株に各種ステロイドホルモンを加えて、対象とするホルモンレセプターの遺伝子発現量の変化を,上記のリアルタイム定量的PCR(Lightcycler)法により定量を施行中である.

人们认为，雄激素受体（AR），雌激素受体（ER），同工酶α，同工酶β和孕激素受体（PR）参与雄激素受体（AR），雌激素受体（ER），雌激素受体（ER），同酶α，同酶α，等酶β和等倍型受体（PR）的作用，但不是及其癌症的癌症，并不存在于Prostate IS癌症，其癌症是癌症的癌症，其功能是偶然的，其功能是偶然的，其功能是偶然的癌症。被澄清了。我们已经从依赖端基因受体依赖性前列腺癌细胞系产生了激素非依赖性菌株。此外，使用DNA微阵列（未发表）研究了父母菌株与我们创建的独立菌株之间基因表达的差异。以下在2002.1）建立用于实时定量PCR（LightCycler）方法的测量系统的雄激素受体（AR），雌激素受体（ER），同工酶β，同工酶β和孕酮受体（PR）的表达水平被定量测量为每个受体的表达水平。实时PCR（LightCycler）用作方法。使用逆转录将每个细胞中表达的总mRNA转化为cDNA，并通过PCR方法扩增该cDNA中每个受体基因的特定部分，为每个受体设计和生产两个特定引物。此外，在量化细胞时，使用杂交来提高特异性。使用探针方法设计和制备了每个基因的特定荧光标记探针。为了使底漆和探针充当测量系统，需要实时PCR（LightCycler）的最佳条件。使用抗激素敏感和抗激素的前列腺癌细胞系，使用提取的mRNA调整了轻环蛋白的最佳条件。将各种类固醇激素添加到母体菌株中，并使用上述实时定量PCR（LightCycler）方法对靶激素受体的基因表达水平的变化进行定量。