定量的PCRによるホルモン耐性前立腺癌のステロイドホルモンレセプターの機能解析

通过定量PCR对激素抵抗性前列腺癌中类固醇激素受体进行功能分析

• 批准号: 14770804
• 负责人: 山田 徹
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Gifu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770804/
• 关键词: 前立腺癌; ホルモン耐性; androgen receptor; progesterone receptor; estrogen receptor; リアルタイムPCR; DNAマイクロアレイ

前立腺癌のホルモン治療への耐性化はandrogen receptor (AR), estrogen receptor (ER) isozymeα、isozymeβ, progesterone receptor (PR)が関与していると考えられているが,これらレセプターの前立腺癌における機能は不明であり、ホルモン耐性化との関連は解明されていない。われわれは既にendrogen receptor依存性前立腺癌細胞株からホルモン非依存性の株を作製した。またこの親株とわれわれが作製した非依存株との間での遺伝子発現の相違を、DNAマイクロアレイを用いて検討した(未発表)。平成14年度は以下のことを施行中である.1)リアルタイム定量的PCR(Lightcycler)法用の測定系の確立androgen receptor (AR), estrogen receptor (ER) isozymeα、isozymeβ, progesterone receptor (PR)の発現量を各receptorのmRNAの発現量として定量的に測定する.その方法としてrealtime PCR (Lightcycler)を使用する.各細胞に発現しているtotal mRNAをreverse transcriptionにてcDNAにし,このcDNA中の各レセプター遺伝子の特異的な部分をPCR法にて増幅するため,特異的なprimerを各レセプター毎に2つづつ設計,作製した.さらに定量する時により特異性を高めるため,hybridization probe法を使用し、各遺伝子に対する特異的な蛍光標識プローベを設計,作製した.以上のprimer, probeが測定系として機能するために、realtime PCR(Lightcycler)における至適条件の調整が必要である.ホルモン感受性およびホルモン耐性前立腺癌細胞株を使用し,抽出したmRNAを用いてLightcyclerの至適条件を調整し,測定系を確立した.2)ホルモン耐性前立腺癌細胞株を用いたステロイドレセプターの発現量の検討親株と、樹立したホルモン耐性前立腺癌細胞株に各種ステロイドホルモンを加えて、対象とするホルモンレセプターの遺伝子発現量の変化を,上記のリアルタイム定量的PCR(Lightcycler)法により定量を施行中である.

The relationship between androgen receptor (AR), estrogen receptor (ER) isozymeα, isozymeβ, progesterone receptor (PR) and the resistance to treatment of advanced adenocarcinoma is unclear. The endrogen receptor-dependent prostate adenocarcinoma cell line was isolated from the non-endrogen receptor-dependent prostate adenocarcinoma cell line. The gene expression of the parent plant and the independent plant is different from that of the parent plant and the DNA gene expression is different from that of the independent plant. 1) Quantitative PCR(Lightcycler) method was used to determine the expression levels of androgen receptor (AR), estrogen receptor (ER) isozyme alpha, isozyme beta, progesterone receptor (PR), mRNA expression levels of each receptor, and quantitative measurement. The method of realtime PCR (Lightcycler) is used. The total mRNA expressed in each cell is reverse transcribed into cDNA, and the specific part of each gene in the cDNA is amplified by PCR, and the specific primer is designed and manufactured. In order to achieve high specificity in quantitative analysis, the hybridization probe method is used to design and produce a specific fluorescent logo for each gene. The above primer, probe and assay system function, realtime PCR(Lightcycler) and adjustment to the appropriate conditions are necessary. 2) To extract mRNA from a variety of Lightcycler and adjust the optimal conditions for Lightcycler detection in a variety of resistant pre-established adenocarcinoma cell lines The quantitative PCR(Lightcycler) method described above is in the process of being implemented.